金雀異黃素對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)FLS分泌的炎癥及血管新生相關(guān)因子影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀(guān)察金雀異黃素(genistein，gen)對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎(collagen type IIinduced arthritis，CIA)大鼠關(guān)節(jié)成纖維樣滑膜細(xì)胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)分泌的白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α，TNF-α)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothel

2、ial growth factor，VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2、3、9(matrix metalloproteinase，MMP-1、2、3、9)的影響。 研究對(duì)象：CIA大鼠關(guān)節(jié)原代成纖維樣滑膜細(xì)胞。 方法：首先，采用II型膠原和完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant，CFA)共同建立CIA大鼠模型，對(duì)大鼠每周進(jìn)行一次關(guān)節(jié)炎指數(shù)(arthritis index，AI)評(píng)分。于造模第六

3、周攝取關(guān)節(jié)X線(xiàn)片，然后處死大鼠，選取大鼠關(guān)節(jié)進(jìn)行關(guān)節(jié)滑膜組織病理檢測(cè)，并取出關(guān)節(jié)滑膜組織，用膠原酶消化法分離培養(yǎng)原代成纖維樣滑膜細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)滑膜細(xì)胞血管細(xì)胞黏附分子(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)的表達(dá)。在CIA大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞培養(yǎng)中加入用不同濃度的gen(100μM，200μM，400μM)及MTX(lmg·L-1)，間接酶聯(lián)免疫吸

4、附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)法檢測(cè)大鼠成纖維樣滑膜細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、TNF-α、VEGF及MMP-1、2、3、9的相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果： 1、Ⅱ型膠原致敏后三天，大鼠開(kāi)始出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹，AI逐漸增高，至造模后第三周最為明顯，觀(guān)察AI評(píng)分、關(guān)節(jié)X線(xiàn)片以及關(guān)節(jié)滑膜組織病理發(fā)現(xiàn)，造模組與空白對(duì)照組比較有顯著性差異。表明造模成功，可滿(mǎn)足本實(shí)驗(yàn)需要。 2、CIA

5、大鼠滑膜細(xì)胞培養(yǎng)至第4代，F(xiàn)CM檢測(cè)其VCAM-1的表達(dá)高達(dá)85.5％，提示所培養(yǎng)的細(xì)胞為成纖維樣滑膜細(xì)胞(FLS)，滿(mǎn)足本實(shí)驗(yàn)要求。 3、不同濃度的gen(100μM，200μM，400μM)及MTX(lmg·L-1)作用于FLS后，細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β、TNF-α、VEGF和MMP-1、2、3、9的分泌受到抑制，且gen的抑制作用隨藥物濃度增加呈劑量依賴(lài)性增強(qiáng)。 結(jié)論： 1、本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了CIA大鼠模型