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1、背景與目的:腸易激綜合征(irritable bowel syndrome,IBS)是臨床上一種常見的胃腸道功能性疾病。內(nèi)臟敏感性增高作為IBS的重要病理生理學(xué)機(jī)制之一已逐漸得到公認(rèn),但具體的機(jī)制還不是很明確。電壓門控鉀離子通道主要可分為兩類:延遲整流鉀通道(sustained delayedrectifier K+ current,IK)和A型瞬時(shí)外向鉀通道(A-type K+ current,IA),它們?cè)谏窠?jīng)元靜息膜電位的維持以及
2、動(dòng)作電位的產(chǎn)生和傳遞過(guò)程中起著重要作用。本研究對(duì)結(jié)腸初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元上電壓門控鉀離子通道與IBS內(nèi)臟高敏感性之間的關(guān)系進(jìn)行了初步研究,以進(jìn)一步了解IBS內(nèi)臟高敏的發(fā)生機(jī)制,為IBS等功能性胃腸疾病的臨床防治提供新的策略和措施。 方法:(1)采用新生大鼠出生后第8到21天直腸灌注0.5%的醋酸建立大鼠內(nèi)臟高敏感模型,在大鼠成年后應(yīng)用行為學(xué)腹部回縮反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)評(píng)分和腹外斜肌肌電
3、圖(electromyographic,EMG)檢測(cè)內(nèi)臟敏感性;組織病理評(píng)估結(jié)腸的炎癥反應(yīng)和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)。(2)通過(guò)腸壁內(nèi)注入熒光染料1,1’-雙十八烷基-3,3,3’3,-4甲基吲哚羰花青-高氯酸鹽(1,1’-dioctadecyl-3,3,3,’3-tetramethylindo-carbocyanine perchlorate,DiI)標(biāo)記支配腸道的初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元,取L6-S2節(jié)段脊髓背根神經(jīng)節(jié)(dorsalroot gangli
4、on,DRG),急性酶解分離制成單細(xì)胞,利用植物凝集素(isolectin B4,IB4)將結(jié)腸初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元分為兩類:IB4+和IB4-。采用膜片鉗記錄結(jié)腸感覺(jué)神經(jīng)元這兩類神經(jīng)元的電壓門控鉀電流及動(dòng)作電位。通過(guò)免疫熒光染色觀察Kv1.4、Kv3.4和Kv4.3在IB4+和IB4-神經(jīng)元的分布。(4)采用膜片鉗技術(shù)記錄對(duì)照鼠和模型鼠IB4+和IB4-兩類結(jié)腸初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元的電壓門控鉀電流及動(dòng)作電位。(3)采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR和Wes
5、tern blot方法對(duì)L6-S2節(jié)段的DRG Kv1.4、Kv3.4和Kv4.3三種α亞單位表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè)。 結(jié)果:(1)新生期(P8-P21)大鼠0.5%醋酸灌腸刺激可以導(dǎo)致大鼠成年后內(nèi)臟敏感性增加,內(nèi)臟高敏大鼠結(jié)腸組織無(wú)明顯的炎癥和組織損傷,但是伴有肥大細(xì)胞明顯的浸潤(rùn),部分肥大細(xì)胞呈脫顆粒狀態(tài)。(2)結(jié)腸初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元可分為IB4+和IB4-兩類。IB4+的結(jié)腸感覺(jué)神經(jīng)元電壓門控鉀電流較IB4-結(jié)腸感覺(jué)神經(jīng)元大,其組成
6、成分包括IA和IK;而IB4-結(jié)腸感覺(jué)神經(jīng)元上電壓門控鉀電流主要為IK成分,IA成分很少。免疫組化顯示Kv1.4、Kv3.4和Kv4.3是構(gòu)成IB4+神經(jīng)元上IA電流的重要α亞單位。(3)內(nèi)臟高敏大鼠IB4+結(jié)腸初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元IA電流密度明顯降低,同時(shí)IA、IK電流失活曲線明顯左移,且神經(jīng)元的興奮性增加;而IB4-的結(jié)腸初級(jí)感覺(jué)神經(jīng)元的電壓門控鉀電流無(wú)明顯變化。(4)內(nèi)臟高敏大鼠L6-S2節(jié)段DRG Kv4.3α亞單位表達(dá)明顯下調(diào),而K
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