結核分枝桿菌蛋白抗原b夾心ELISA方法的建立及其在結核性腦膜炎診斷中的應用.pdf

1、結核性腦膜炎（tuberculous meningitis. TBM）是一種最常見的神經(jīng)系統(tǒng)結核病。在肺外結核中大約有5％～15%的患者累及神經(jīng)系統(tǒng)，約占神經(jīng)系統(tǒng)結核病的70%左右。近年來，由于人口流動頻繁，免疫抑制劑的廣泛、大量應用，耐藥菌種的出現(xiàn)及艾滋?。ˋcquired Immune Deficiency Syndrome.AIDS）患者的增多，不論是在國內，還是在國外，結核病的發(fā)病率及病死率的趨勢，都是在不斷地逐漸增高。結核病已

2、經(jīng)成為了我們目前需要迫切解決的重大問題，因其對我們全人類的健康造成重大威脅，故成為全球關注的衛(wèi)生問題，并成為部分相對比較落后的發(fā)展中國家和經(jīng)濟條件差的部分地區(qū)，特別是在一些艾滋病高發(fā)地區(qū)（比如非洲部分國家和地區(qū)）的人群中成為首要死因。因此越來越受到人們重視。抗原和腦脊液以其特有的優(yōu)勢，作為檢測對象成為我們研究的重點。酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay.ELISA）法，以其快速簡潔、價格低廉、

3、操作方便等優(yōu)勢成為我們選擇的根本原因。而單克隆抗體(monoclonal antibody.mAb)和多克隆抗體(polyclonal antibody.pAb)的制備，為我們檢測抗原奠定基礎。
　　目的:
　　通過蛋白抗原 b（38kDa抗原）單克隆抗體和多克隆抗體的制備，對單克隆抗體的篩選，用雙抗體夾心ELISA法，摸索包被時間、抗體濃度、優(yōu)化條件等，從而，建立定量檢測腦脊液中結核分枝桿菌蛋白抗原b（38kDa抗原）的夾

4、心ELISA法，以期建立一種能夠區(qū)分結核性腦膜炎活動性感染與潛伏性感染的方法。
　　方法:
　　制備蛋白抗原 b（38kDa抗原）的鼠源性單克隆抗體(mAb)及兔多克隆抗體（pAb）；以單克隆抗體為包被抗體，多克隆抗體為檢測抗體，建立檢測結核分枝桿菌蛋白抗原b（38kDa抗原）的雙抗體夾心ELISA；應用此方法檢測正常人（n=6）、非結核性腦膜炎患者（n=26）及臨床確診結核性腦膜炎患者（n=42）的腦脊液標本中蛋白抗原 b

5、（38kDa抗原）的含量，并分析其與結核性腦膜炎活動性感染的相關性。
　　結果:
　　成功建立了檢測蛋白抗原b（38kDa抗原）的夾心ELISA方法，敏感度可達0.4μg/L。應用該方法在正常人及非結核性腦膜炎患者腦脊液中未檢測到蛋白抗原 b（38kDa抗原）；在結核性腦膜炎患者腦脊液中蛋白抗原b（38kDa抗原）含量顯著升高。
　　結論:
　　通過夾心ELISA方法檢測結核分枝桿菌特異性抗原，為結核性腦膜炎的早