耳蝸細胞內氧化狀態(tài)對噪聲誘發(fā)毛細胞凋亡-壞死的調控作用研究.pdf

1、近年來研究發(fā)現(xiàn)：噪聲暴露會引起耳蝸毛細胞呈現(xiàn)兩種截然不同的死亡方式-凋亡(Apoptosis)和壞死(Necrosis)，而且凋亡和壞死的毛細胞在形成時間的先后以及在損傷區(qū)域的分布具有一定的規(guī)律性。噪聲暴露會引起耳蝸細胞內劇烈的代謝活動，在耳蝸細胞內產生大量活性氧簇(ROS)，過量的ROS引起細胞內氧化作用急劇增加，而細胞內氧化狀態(tài)的改變可能是決定噪聲暴露后毛細胞凋亡/壞死的關鍵因素。在本研究中，我們首先局部應用布替諾林(BSO，谷胱甘

2、肽特異性抑制劑)或還原型谷胱甘肽(GSH)改變耳蝸細胞的氧化狀態(tài)，之后觀察噪聲暴露誘發(fā)毛細胞死亡方式的變化。結果如下： 一、經底回鼓階-后半規(guī)管徑路耳蝸灌流給藥新方法的應用與探討 為使藥物快速進入耳蝸，并能夠均勻分布于耳蝸各回，我們在傳統(tǒng)的耳蝸灌流技術基礎上創(chuàng)立了一種新的經底回鼓階-后半規(guī)管徑路活體灌流給藥的新方法。分別在耳蝸底回距離圓窗膜約2.0mm處以及后半規(guī)管各鉆一直徑約0.20mm的小孔，用微量注射泵以1μl/m

3、in速度將10μl人工外淋巴液自鼓階鉆孔注入，液體自后半規(guī)管鉆孔流出。灌流結束后封閉鉆孔以及聽泡骨窗。術前、術后聽力檢測顯示：1K，2K，4K等頻率手術前、后ABR閾值差異無統(tǒng)計學意義；8K，16K等頻率術后即刻ABR閾值增高約10dB，4h后明顯恢復(與術前比較差異無統(tǒng)計學意義)。碘化丙啶(PI)染色后全耳蝸基底膜鋪片觀察未見毛細胞凋亡、壞死及缺失。 二、BSO、GSH耳蝸局部應用后對灰鼠聽功能及耳蝸細胞形態(tài)的影響 兩

4、組灰鼠，每組10只，利用前述的活體耳蝸灌流給藥技術，分別將10μl60mM的BSO溶液(BSO組)或10μl10mM的GSH溶液(GSH組)注入動物右側耳蝸(實驗耳)，左側(對照耳)注入等量的人工外淋巴液。給藥后4h(BSO組)、30min(GSH組)分別檢測兩組動物ABR閾值變化、耳蝸細胞內GSH水平變化，并利用基底膜鋪片技術觀察藥物本身是否會造成急性毛細胞損傷。結果顯示：BSO組中實驗耳GSH水平、GSH/GSSG比例較對照耳明顯降

5、低；GSH組中實驗耳GSH水平、GSH/GSSG比例較對照耳明顯升高，差異均具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。BSO、GSH本身并未引起聽力改變，也未引起急性毛細胞損傷。 三、耳蝸細胞內氧化狀態(tài)的改變對噪聲誘發(fā)毛細胞死亡方式的影響 20只灰鼠平均分為兩組，按照第二部分中的方法處理后，將動物暴露于中心頻率4kHz，強度117dB的窄帶噪聲2h。兩組動物于噪聲暴露結束后4h，取兩側耳蝸進行PI染色、基底膜鋪片，然后分別計數(shù)凋亡