中國漢族iNOS基因多態(tài)性及血清iNOS活性與白癜風(fēng)發(fā)病相關(guān)性研究.pdf

1、白癜風(fēng)是皮膚科常見的慢性疾病，臨床上以斑片狀或泛發(fā)狀皮膚色素脫失為特征，患者表皮皮損處黑素細(xì)胞明顯減少或完全消失。白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，不同學(xué)者就其病因及發(fā)病機(jī)理提出多種學(xué)說，如自身免疫學(xué)說、神經(jīng)學(xué)說、黑素細(xì)胞自毀學(xué)說、遺傳學(xué)說、黑素細(xì)胞生長因子缺乏學(xué)說等。但任何單一學(xué)說均不能完全解釋白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)理，有學(xué)者認(rèn)為多因素、多基因累積共同導(dǎo)致了白癜風(fēng)的發(fā)生，不同的個(gè)體可能存在不同病因的組合，其中遺傳基因的易感性在其中占據(jù)了重要的地位。<

2、br>　　單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)是決定人類疾病(尤其是多基因疾病)易感性的主要因素，可以滿足對疾病相關(guān)基因定位研究的需要，尤其是對多基因遺傳性疾病高精確度基因定位的要求。因此應(yīng)用SNP檢測技術(shù)初步篩選白癜風(fēng)可能的易感基因，為進(jìn)一步尋找與定位白癜風(fēng)發(fā)病密切相關(guān)基因打下基礎(chǔ)。
　　iNOS基因編碼人類誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible notric oxide syn

3、thase），在內(nèi)毒素或其它細(xì)胞因子如TNF、IFN、IL-1、IL-6等誘導(dǎo)下,iNOS活化生成一氧化氮(NO)，一氧化氮是一種細(xì)胞間信使，近年來又被看作是一種細(xì)胞毒效應(yīng)分子，可參與自身免疫病的發(fā)病，其合成和生物學(xué)效應(yīng)受多種細(xì)胞因子調(diào)控。一氧化氮可能通過參與黑素細(xì)胞破壞和調(diào)節(jié)自身免疫在白癜風(fēng)發(fā)病中起作用。
　　我們推測iNOS基因單核苷酸多態(tài)性可能與漢族人群的白癜風(fēng)發(fā)病有相關(guān)性，在本實(shí)驗(yàn)中，我們選擇了位于iNOS基因啟動子區(qū)改變

4、iNOS活性的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)，以及第16號外顯子存在一個(gè)使絲氨酸(Ser)轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼?Leu)的C→T點(diǎn)突變進(jìn)行分析研究，并進(jìn)一步對白癜風(fēng)患者血清iNOS活性水平進(jìn)行檢測。
　　目的：
　　分析iNOS基因單核苷酸多態(tài)性與中國漢族人群白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性，并進(jìn)行相關(guān)功能學(xué)的初步研究，探討白癜風(fēng)的遺傳學(xué)背景及發(fā)病機(jī)制，為白癜風(fēng)的診斷和預(yù)后提供新的指標(biāo)。
　　方法：
　　應(yīng)用病例－對照研究方法，在中國漢族人群中選

5、取無血緣關(guān)系的白癜風(fēng)患者和性別、年齡與之相配比的正常人群作為研究對象，收集外周血，提取基因組DNA，應(yīng)用PCR-RFLP及MS-PCR技術(shù)，探索iNOS基因多態(tài)性位點(diǎn)與白癜風(fēng)易感性的關(guān)系，并采用比色法檢測了血清iNOS活性。
　　結(jié)果：
　　與iNOS-954GG基因型相比，基因型GC有增加罹患白癜風(fēng)危險(xiǎn)性的趨勢，（adjustedOR=1.35,95％CI=1.00-1.81）；聯(lián)合基因型GC+CC在白癜風(fēng)患者中分布頻率高

6、于正常人群（P=0.029），且增加了罹患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)性（adjustedOR=1.36,95％CI=1.02-1.81）。在臨床分型中聯(lián)合基因型GC+CC與尋常型白癜風(fēng)(adjustedOR=1.36,95％CI=1.01-1.82)、活動期白癜風(fēng)(adjustedOR=1.35,95％CI=1.00-1.82)和不伴有自身免疫病的白癜風(fēng)(adjustedOR=1.38,95％CI=1.04-1.85)發(fā)病相關(guān),與不同性別、發(fā)病年齡及

7、是否伴有家族史的白癜風(fēng)的發(fā)病相關(guān)性不顯著。
　　通過PCR-RFLP方法發(fā)現(xiàn)，iNOS-1173位點(diǎn)及E16+14位點(diǎn)突變的T等位基因頻率在白癜風(fēng)患者及正常對照組中無顯著差別（P=0.329、0.068）。進(jìn)一步分析臨床資料也未發(fā)現(xiàn)與白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性。繼而我們對上述iNOS三個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行單倍體型分析發(fā)現(xiàn)，單倍體基因型CCC在白癜風(fēng)患者中的頻率顯著高于對照組，且增加了白癜風(fēng)罹患的危險(xiǎn)性(P=0.016，adjustedOR=1.44

8、,95％CI=1.07-1.94)。
　　進(jìn)一步檢測血清iNOS活性發(fā)現(xiàn)，患者組血清iNOS活性（19.56±6.55U/ml）明顯高于對照組（12.82±3.35U/ml）（P<0.05），基因分型結(jié)果顯示，攜帶C等位基因的人群血清中iNOS活性升高（19.39±5.36U/mlvs.15.54±6.16U/ml，P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　本研究首次分析了中國漢族人群中iNOS基因單核苷酸多態(tài)性和白癜風(fēng)發(fā)病的

9、相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)iNOS-954位點(diǎn)多態(tài)性和漢族白癜風(fēng)發(fā)病相關(guān)，iNOS-1173位點(diǎn)及E16+14位點(diǎn)與漢族白癜風(fēng)發(fā)病無相關(guān)性，并進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者血清iNOS活性升高，iNOS-954位點(diǎn)突變后血清iNOS活性升高，進(jìn)一步證明了iNOS基因多態(tài)性與白癜風(fēng)發(fā)病的相關(guān)性，為研究漢族人群白癜風(fēng)易感基因打下基礎(chǔ)。由于種族差異，大樣本量、不同種族的重復(fù)性研究仍十分必要。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果支持白癜風(fēng)的發(fā)病與iNOS基因相關(guān)，但其臨床意義有待深入研