不同消化性疾病來源的幽門螺桿菌毒力基因cagA、vacA、oipA、dupA的檢測及其意義.pdf

1、目的：
　　幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，以下簡稱Hp）是引起胃炎、消化性潰瘍、胃粘膜淋巴組織相關(guān)性淋巴瘤和胃癌的重要病原體。全球約有一半以上人口感染Hp，但在感染人群中只有約20％發(fā)生消化性疾病，且疾病的嚴重程度不同，其原因尚未闡明，可能與細菌基因高度多態(tài)性、宿主和環(huán)境等因素有關(guān)。HpcagA、vacA、oipA、dupA四種毒力基因是幽門螺桿菌致病的重要因素。幽門螺桿菌感染的特點，主要體現(xiàn)在菌株基因多態(tài)性

2、和地區(qū)分布差異性，且各種基因與疾病之間的關(guān)系也有地區(qū)差異性。本研究旨在調(diào)查胃癌高發(fā)的福州地區(qū)的Hp cagA及其C端的EPIYA基序、vacA和dupA分型以及oipA基因開關(guān)狀態(tài)，了解本地區(qū)的幽門螺桿菌基因多態(tài)性，并探討本地區(qū)消化性疾病與這些基因、性別和年齡之間的關(guān)系，以便對幽門螺桿菌的致病機制有更加深入的認識。
　　方法：
　　1．幽門螺桿菌的分離與鑒定：從福建省腫瘤醫(yī)院，福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院和福建省立醫(yī)院采集的胃組

3、織標本（來自慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌患者），分離培養(yǎng)Hp，組織研磨后接種于布氏平板，于厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)3-5d，經(jīng)尿素酶、過氧化氫酶及形態(tài)學(xué)鑒定確認。
　　2．用高純度基因組DNA模板提取試劑盒（購自羅氏公司）提取Hp基因組DNA，并以其為模板，PCR擴增cagA3′端序列、vacA基因s區(qū)、i區(qū)、m區(qū)、oipA信號區(qū)、dupA（jhp917和jhp918）基因。
　　3．cagA3′端和oipA信號區(qū)PCR后送生工生物（上

4、海）有限公司，sanger法，ABI-PRISM3730測序儀進行基因測序，Bioed it分析軟件分析EPIYA基序類型和oipA基因開關(guān)狀態(tài)。
　　4．統(tǒng)計分析：運用方差分析比較各疾病組之間年齡的差異，卡方檢驗分析疾病與各基因之間的關(guān)系，logistic回歸分析各疾病組之間的基因差異。
　　結(jié)果：
　　1.分離培養(yǎng)獲得82株幽門螺桿菌，其中分離自慢性胃炎患者37株，消化性潰瘍患者25株（其中胃潰瘍12株，十二指腸潰

5、瘍13株），胃癌患者20株。疾病與性別和年齡的關(guān)系：單因素卡方分析胃炎，消化性潰瘍和胃癌組間性別差異，χ2=7.39，P<0.05，P=0.022，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明消化性潰瘍和胃癌患者中男性比例高于胃炎患者中男性的比例；方差分析三組疾病間年齡差異， F=1.51，P>0.05，P=0.227，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2.基因檢測及統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果：所有被測菌cagA基因均為陽性， EPIYA分型結(jié)果：胃炎菌株：EPIYA-AB

6、D32株（86.5%），EPIYA-AD1株（2.7%）， EPIYA-ABBD4株（10.8%）；消化性潰瘍菌株： EPIYA-ABD23株（92%）， EPIYA-AB1株（4%），EPIYA-ABBD1株（4%）；胃癌菌株：EPIYA-ABD19株（95%），EPIYA-ABBD1株（5%）, EPIYA-ABD和非EPIYA-ABD型三組疾病間卡方分析，χ2=1.20，P>0.05 P=0.639。總體菌株，EPIYA-ABD型

7、74株，占90.2%，表明本地區(qū)，EPIYA分型以東方型的EPIYA-ABD為主，各疾病組之間無顯著差異。
　　vac A基因分型結(jié)果：胃炎菌株：s1c/i1/m1b13株(35.1%)，s1c/i1/m224株（64.9%）；消化性潰瘍菌株：s1a/i1/m1b1株（4%），s1c/i1/m1b15株（60%）， s1c/i1/m29株（36%）；胃癌菌株：s1 c/i1/m1a1株（5%），s1c/i1/m1b9株（45%），

8、 s1c/i1/m210株（50%）。未檢出s2型、i2型vacA。vacAm區(qū)， m2型菌株所占比例為52.4%，m1型所占比例為47.6%。logistic回歸分析，消化性潰瘍組與胃炎組間m1型相比，OR=3.282，95%可信區(qū)間為（1.138，9.468），P<0.05 P=0.028，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明 vacAm1型增加了患者發(fā)展為消化性潰瘍的危險性；m2型菌株比例高于文獻報道的東亞地區(qū)的韓國（8.65%），低于文獻報道

9、的東南亞地區(qū)的越南（63.8%）。
　　所有被測菌oipA基因均為陽性，測序分析其開關(guān)狀態(tài)均為“開”（均為功能性oipA），“C T”重復(fù)序列特征有“none”（6株），“1+4”（2株），“2+1”（2株），“2+1+1+1”（4株），“3+1”（56株），“3+2”（5株），“5+2”（1株），“6”（5株），“3”（1株）九種類型。
　　dupA基因陽性率，慢性胃炎為11株（29.7%），消化性潰瘍5株（20%）（其中

10、胃潰瘍3株，十二指腸潰瘍2株），胃癌9株（45%）。十二指腸潰瘍組與非十二指腸潰瘍組間dup A基因卡方檢驗，χ2=0.76，P>0.05 P=0.382，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。表明作為十二指腸潰瘍重要指標的DupA基因在本研究中，未體現(xiàn)這一重要作用。表明dupA基因尚不能作為福州地區(qū)Hp致十二指腸潰瘍的標記基因。
　　綜合分析EPIYA、vacA和 dupA基因，EPIYA-ABD+dupA+s1/m1菌株在各疾病組間,胃炎菌株中占

11、5.4%，消化性潰瘍菌株中占16%，胃癌菌株中占30%，卡方檢驗χ2=6.340，P<0.05 P=0.036，表明EPIYA-ABD型，vacA基因s1/m1型，dupA同時陽性菌株增加了患消化性潰瘍和胃癌的危險性。
　　結(jié)論：
　　1.福州地區(qū)Hp菌株的cagAEPIYA分型體現(xiàn)了東方國家Hp菌株的特征，以EPIYA-ABD型為主，未見西方型EPIYA-ABC菌株。
　　2. vacAm1型是消化性潰瘍的危險因素，