Sinomenine對移植肝急性排斥反應影響及CDFI、IBS對肝臟病理損害評價的實驗研究.pdf

1、肝移植已經(jīng)成為治療終末期肝病、急性肝衰竭的唯一有效的方法。臨床肝移植技術的發(fā)展有賴于實驗動物的研究，大鼠原位肝移植（OLT）模型由于其價格低廉、飼養(yǎng)管理便捷、操作簡單、遺傳背景清晰等成為眾多實驗動物模型的首選，是研究肝臟移植器官保存、缺血-再灌注損傷、血流動力學、免疫抑制劑、移植排斥反應及免疫耐受的理想動物模型。經(jīng)過30多年中外學者的改進，“二袖套法”成為廣泛采用的經(jīng)典術式。國內(nèi)由于鼠種、價格等諸多因素，廣泛選用SD與Wistar大鼠進

2、行移植，認為SD-Wistar是一組高排斥反應的模型。 在肝移植治療方面盡管各種新的免疫抑制劑不斷問世，但移植后的排斥反應仍無法完全避免，誘導移植物抗原免疫耐受，成為解決器官移植排斥的根本方法。此外，免疫抑制劑和抑制方案仍存在不少弊端，尋找高效、低毒及價格低廉的免疫抑制藥物為臨床移植學界日益關注。青藤堿（SIN）是從防己科防己屬青風藤中分離出的主要活性成分，分子式為C19H23NO4，具有鎮(zhèn)痛、抗炎等作用，臨床主要用于類風濕的治

3、療，療效確切。近年來經(jīng)中、日等國學者的研究，青藤堿的免疫抑制作用受到高度重視。 在移植肝臟的病理診斷學方面，彩色多普勒是目前最為常用的影像診斷工具，應用彩色多普勒可以對移植肝臟血流進行監(jiān)測，了解血流動力學變化，但由于二維圖像缺乏客觀性，影響了其對移植后排斥反應的診斷價值。背向散射積分技術是近年發(fā)展起來的組織定征技術，與組織的病理改變有較好的相關性，有望成為又一重要的診斷技術。 本實驗以大鼠原位肝移植為模型，探討青藤堿對大

4、鼠原位肝移植急性排斥反應的作用機制，以及聯(lián)合環(huán)孢素A的治療效果，同時應用彩色多普勒與背向散射積分技術監(jiān)測治療后大鼠肝臟的聲學特征，為青藤堿的臨床應用和背向散射積分技術的術后監(jiān)測提供理論依據(jù)。 第一部分 大鼠肝移植模型的建立和術式改進 目的：探討兩種改進型大鼠肝移植手術術式對大鼠生存率的影響。 方法：經(jīng)典術式組建立SD-Wistar模型70例，改進術式組35例，比較無肝期時間、肝上下腔靜脈吻合時間和大鼠一周生存率。

5、觀察經(jīng)典術式組大鼠的生存時間和肝臟病理改變。 結果：經(jīng)典術式組無肝期20．3±1．6min；吻合肝上下腔靜脈時間10．7±1．3min。改進術式組無肝期26．7±4．1min；吻合肝上下腔靜脈時間15．1±1．7min。一周生存率，經(jīng)典術式組17．1%，改進術式組91．4%。經(jīng)典手術組12只手術成功大鼠生存時間11-22天，平均為14．8±2．8天，大鼠死亡后肝臟病理表現(xiàn)為WilliamsⅢ級。 結論：SD-Wistar

6、大鼠原位肝移植模型是一組高排斥反應模型。通過改進肝上下腔靜脈離斷方式和門靜脈袖套制作技術，能夠提高大鼠血管吻合質(zhì)量。大鼠術后能否長期存活的關鍵在于良好的肝上下腔靜脈、門靜脈吻合，吻合質(zhì)量較無肝期時間更為重要。 第二部分 青藤堿對大鼠原位肝移植急性排斥反應影響的實驗研究 目的：探討青藤堿、環(huán)孢素及兩者聯(lián)合應用對大鼠肝移植模型排斥反應的影響 方法：正常組：8只Wistar大鼠為空白對照。建立SD-Wistar OLT

7、模型，分為四組，對照組：8只未予藥物干預，CsA組：8只給予環(huán)孢素A30 mg/kg/d，SIN組：8只給予青藤堿40 mg/kg/d，CsA+SIN組：8只給予青藤堿40 mg/k9/d+環(huán)孢素15 mg/kg/d。檢測肝功、腎功變化，ELISA法比較各組血漿中IL-2、IL-10、sICAM-1情況，免疫組化法分析肝內(nèi)TGF-β1表達情況，RT-PCR法分析腎臟TGF-β1mRNA表達情況，TUNEL法分析肝臟內(nèi)淋巴細胞的凋亡情況，

8、HE染色分析肝臟的病理損害。 結果：①對照組肝臟功能損害最為明顯，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，總膽紅素升高、直接膽紅素明顯升高。各組間尿素氮和肌酐均無顯著性差異。②CsA組、SIN組、SIN+CsA組IL-2明顯低于對照組。③SIN、SIN+C sA明顯刺激IL-10分泌，CsA無明顯作用。④對照組sICAM-1明顯高于其他四組，隨著損傷程度減輕sICAM-1呈下降趨勢。⑤各組肝臟表達的TGF-β1蛋白和腎臟TGF-β1 mRN

9、A表達均有顯著性差異，并CsA組表達最高。⑥移植后肝內(nèi)匯管區(qū)淋巴細胞凋亡以SIN+CsA組最為明顯。⑦血漿sICAM與肝臟病理損害間呈正相關。 結論：①SIN能夠抑制促炎性因子IL-2、sICAM-1的分泌，促進抑炎性因子IL-10、TGF-β1的表達，抑制炎癥反應；②SIN與CsA聯(lián)合作用能夠促進匯管區(qū)的淋巴細胞凋亡，誘導免疫耐受的形成；⑨SIN與CsA聯(lián)合作用能減少CsA的用量，減輕腎臟纖維化因子TGF-β1的表達；④sIC

10、AM-1是監(jiān)測排斥反應發(fā)生和評價抗排斥治療效果的可靠指標。 第三部分 應用彩色多普勒與背向散射積分技術對大鼠移植肝臟病理損害的評價 目的：應用彩色多普勒與背向散射積分技術評價移植后大鼠肝臟病理損害和藥物的治療作用。 方法：正常組：8只Wistar為空白對照。建立SD-Wistar OLT模型，分為四組，對照組：8只未予藥物干預，CsA組：8只給予環(huán)孢素A30mg/kg/d，SIN組：8只給予青藤堿40 mg/kg

11、/d，CsA+SIN組：8只給予青藤堿40 mg/k9/d+環(huán)孢素15 mg/kg/d。術后4天、10天測量肝臟的IBS和門靜脈、下腔靜脈的血流速度，術后10天處死大鼠取肝臟組織行病理檢查。 結果：①門靜脈血流速度：術后4天對照組明顯低于各手術組，CsA組與SIN+CsA組速度顯著增快，SIN組輕度增快。術后10天血流速度普遍下降。CsA組與SIN+CsA組仍快于正常組，SIN組與正常組無差異。②IBS對比：術后4天對照組與SI