胚胎先天性神經(jīng)管缺陷PLA2、COX-2表達及基因治療.pdf

1、目的:
　　研究PLA2、COX-2基因在胚胎先天性神經(jīng)管缺陷大鼠的表達,探討PLA2、COX-2基因?qū)ε咛ド窠?jīng)管缺陷大鼠模型的影響機制。
　　方法:
　　24只SD雌性大鼠分組分為3組:第一組為正常對照組,8只,正常飼養(yǎng),妊娠12日后共取出80只大鼠胚胎,做HE染色觀察胚胎形態(tài)學及免疫熒光染色的方法觀察PLA2、COX-2表達;第二組為實驗模型組,8只,受孕后第6天經(jīng)過尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)構建先天性神經(jīng)管缺

2、陷組大鼠,妊娠12日后共取出80胚胎,做HE染色觀察胚胎形態(tài)學及免疫熒光染色的方法觀察PLA2、COX-2表達,第三組為基因治療組,受孕第6天經(jīng)過尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)構建先天性神經(jīng)管缺陷組大鼠,妊娠12日后共取出80胚胎,離體培養(yǎng)1周后提取各組胚胎的卵黃囊細胞的mRNA,通過PCR技術對PLA2、COX-2基因水平分析,應用Western blotting技術,對卵黃囊細胞PLA2、COX-2蛋白表達水平檢測,通過免疫熒光檢測

3、對胚胎進行觀察分析。采用四表格χ2檢驗比較正常組與糖尿病組之間大鼠胚胎神經(jīng)管發(fā)育的差異,PLA2、COX-2在胚胎神經(jīng)管缺陷中表達的差異,比較轉(zhuǎn)基因治療前后PLA2、COX-2在胚胎神經(jīng)管缺陷中表達的差異。使用統(tǒng)計學軟件SPSS16.1進行處理,檢驗水準α=0.05,p＜0.05表示有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)果:
　　1.通過鏈脲佐菌素(STZ)構建的先天性神經(jīng)管缺陷組大鼠成功實現(xiàn)。
　　2.正常對照組大鼠胚胎神經(jīng)管發(fā)育形

4、態(tài)學分析正常,糖尿病胚胎神經(jīng)管發(fā)育明顯異常,兩者存在統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　3.胚胎前列腺素酶PLA2及前列腺素合成酶COX-2在實驗糖尿病組中表達較正常組下降,兩者存在統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　4.免疫熒光檢查發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)在接受基因治療后的神經(jīng)管缺陷胚胎PLA2、COX-2基因表達比轉(zhuǎn)基因治療前明顯增強,兩者存在統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　PLA2、COX-2基因表達在SD大鼠神