人胚骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖、定向分化及轉(zhuǎn)bFGF基因的研究.pdf

1、　　目的：探索人胚骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell,MSC)的體外增殖條件和定向分化為多巴胺能神經(jīng)元的誘導(dǎo)條件；同時,以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體,嘗試把人bFGF基因轉(zhuǎn)入MSC,為進一步利用MSC進行帕金森疾病的細胞替代治療和基因治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：采用MTT比色法檢測不同接種密度、不同濃度的胎牛血清、EGF和PDGF-BB對MSC生長的影響；應(yīng)用RA、bFGF、FGF-8和B

2、DNF對不同代數(shù)的MSC進行誘導(dǎo),通過細胞免疫熒光和Western blot鑒定誘導(dǎo)后的細胞；構(gòu)建pLXSN-bFGF病毒質(zhì)粒,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染PA317包裝細胞,G418篩選,PCR鑒定抗性克隆中bFGF基因的整合情況,制備相應(yīng)的病毒,感染MSC。
　　結(jié)果：以接種密度為1×10~4個/ml、加入10%胎牛血清、10ng/ml EGF和10ng/ml PDGF-BB的培養(yǎng)條件最有利于MSC的增殖；MSC經(jīng)RA誘導(dǎo)后定向分化為不具備多巴

3、胺能神經(jīng)元表型的神經(jīng)元樣細胞,經(jīng)bFGF、FGF-8和BDNF誘導(dǎo)后,大部分細胞定向分化為神經(jīng)元樣細胞而非神經(jīng)膠質(zhì)細胞,其中約20%的細胞還獲得了多巴胺能神經(jīng)元的表型；各代MSC之間的分化效果無明顯差別；pLXSN-bFGF病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PA317包裝細胞后,能篩選出抗性克隆,PCR鑒定結(jié)果為陽性；pLXSN-bFGF病毒轉(zhuǎn)染MSC后,經(jīng)過G418的篩選,只得到少量的抗性細胞,而無法增殖形成克隆。
　　結(jié)論：成功優(yōu)化了MSC的增殖條