進展性結直腸腺瘤再發(fā)相關分子的作用及其機制研究.pdf

1、目的:進展性結直腸腺瘤(ACRA)是結直腸癌(CRC)的癌前疾病，早期識別ACRA再發(fā)是降低CRC發(fā)病率的關鍵。本課題旨在通過高通量芯片初篩和臨床樣本驗證，尋找ACRA切除術后腺瘤再發(fā)相關microRNAs(miRs)，并從miR靶基因角度初步探討了可能影響ACRA再發(fā)的分子機制。
　　方法:通過miRmicroarray，檢測腺瘤再發(fā)進展性結直腸腺瘤(RACRA)和未腺瘤再發(fā)進展性結直腸腺瘤(NRACRA)的miR的差異表達譜;

2、篩選腺瘤再發(fā)相關miR，用qRT-PCR分別在福爾馬林固定-石蠟包埋(FFPE)和糞便標本中對芯片結果進行驗證，以此評估FFPE和糞便miR對ACRA切除術后腺瘤再發(fā)的預測價值。對已證實的與腺瘤再發(fā)相關的miR-194，用生物信息學軟件預測其靶基因，挑選與腫瘤細胞的增殖關系密切的靶基因進行研究。應用基因干預方法、熒光素酶報告實驗、靶基因結合區(qū)突變實驗確立AKT2為miR-194的靶基因。利用原位雜交(ISH)和免疫組化(ICH)分別在正

3、常結直腸組織、RACRA和NRACRA的FFPE組織中觀察miR-194和AKT2的表達，進一步驗證miR-194和AKT2是否與腺瘤再發(fā)相關，同時觀察兩者的負調控關系。
　　結果:
　　1.miR-10a,miR-141,miR-146a,miR-151,miR-194和miR-3607-3p在正常結直腸組織、NRACRA和RACRA中表達依次降低，符合腫瘤發(fā)展的規(guī)律，故作為候選miR在臨床隊列中進一步驗證。
　　2

4、.在回顧性隊列中，miR-194以閾值log10(2?！鰿t)≤0.1311為界，能較好地預測腺瘤再發(fā)，敏感性和特異性分別為71.0％和78.0％。miR-194低表達在前瞻性隊列中同樣具有較好的預測能力，敏感性和特異性分別為76.1％和77.2％?；贔FPEmiR-194低表達、吸煙、飲酒嗜好和CRC一級親屬是ACRA切除后腺瘤再發(fā)的獨立高危因素，聯(lián)合后預測效率明顯提高，AUC達0.860。
　　3.miR-194在糞便和FF

5、PE組織中表達量呈顯著正相關。同時，糞便miR-194具有較好的腺瘤再發(fā)的預測效率，以閾值log10(2。△Ct)≤1.0276為界，敏感性和特異性分別為60.0％和88.1％。
　　4.AKT2為miR-194的靶基因。miR-194和AKT2在正常結直腸組織、NRACRA和RACRA組織中表達分別依次降低和增高，兩者呈顯著負相關。
　　結論:基于FFPE或糞便miR-194低表達可有效預測ACRA切除后腺瘤再發(fā)，在有煙酒