PKD1基因?qū)w外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移影響的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：常染色體多囊腎病(ADPKD)是最為常見和多發(fā)的遺傳性疾病，PKD1是主要的致病基因，占所有病人中的85％，其主要特征主要是在腎臟或肝臟的小管進(jìn)行性擴(kuò)張的囊腫。PKD1所編碼的蛋白PC-1功能廣泛，有研究證實(shí)PC-1參與了調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、凋亡，鈣離子通道的調(diào)節(jié)，參與了G-蛋白偶連的受體通路，PC-1的IG-g結(jié)構(gòu)域參與細(xì)胞與細(xì)胞以及細(xì)胞與基質(zhì)之間的粘附，被認(rèn)為可能是細(xì)胞與細(xì)胞/基質(zhì)的粘附受體。此外，有推測(cè)PC-1是做為腫瘤抑制因子

2、蛋白家族中的一個(gè)新的成員。本實(shí)驗(yàn)在前人工作的基礎(chǔ)上利用已經(jīng)構(gòu)建好的PKD1表達(dá)載體，通過人的肝癌、結(jié)腸癌、肺瘤細(xì)胞株為模型來研究PKD1基因的過表達(dá)對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為主要是涉及細(xì)胞遷移的影響及其分子機(jī)理研究。 方法：分別以人的肝癌、結(jié)腸癌、肺瘤細(xì)胞株為模型，建立人的PKD1 cDNA轉(zhuǎn)基因穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，并將其分為4組。實(shí)驗(yàn)組1，外源性人的PKDl轉(zhuǎn)基因組；對(duì)照組2，空載pcDNA3.1轉(zhuǎn)染組；對(duì)照組3，陰性對(duì)照組；

3、對(duì)照組4，特異性信號(hào)通路抑制子處理組。分別觀察過表達(dá)PDK1腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的粘附情況，細(xì)胞間的粘附情況，以及腫瘤細(xì)胞的遷移情況和腫瘤對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的的侵襲情況。Western blotting來探討其可能涉及的大概分子機(jī)制。 結(jié)果：①PKD1處理組：由于PKD1基因的過表達(dá)使腫瘤細(xì)胞對(duì)Ⅰ型膠原粘附增強(qiáng)，細(xì)胞數(shù)目比未處理組及空載對(duì)照組高出0.5％(P<0.05)。②細(xì)胞聚集實(shí)驗(yàn)表明，PKD1處理組細(xì)胞比其它對(duì)照組的細(xì)胞聚集能力

4、增強(qiáng)，PKDl處理組聚集的細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞團(tuán)塊的大小都比未處理的要多。③細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)顯示，PKD1處理組細(xì)胞遷移速度顯著燹慢，在相同的時(shí)間內(nèi)，陰性對(duì)照細(xì)胞劃痕合攏，而PKD1處理組變化不大。④侵襲實(shí)驗(yàn)表明，PKD1處理組細(xì)胞侵襲力明顯減弱，和其它對(duì)照組相比，侵入膠原的細(xì)胞數(shù)量減少大約3倍(P<0.01)。⑤Westernblotting檢測(cè)PKDl對(duì)體外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞粘附和侵襲力的影響作用可能部分通過Wnt信號(hào)通路。 結(jié)論：通過體外