應(yīng)用DNA疫苗免疫制備人PAK4和Mig-2單克隆抗體的研究.pdf

1、　　最新的研究表明：PAK4和Mig-2兩種基因與腫瘤的形成與發(fā)展密切相關(guān)。制備針對PAK4和Mig-2的單克隆抗體，是為了對腫瘤的診斷，治療提供依據(jù)。利用原核表達的PAK4和Mig-2蛋白作抗原包被酶標板，對經(jīng)典間接ELISA方法的各個反應(yīng)參數(shù)作了探索，其中包括酶標反應(yīng)板均一性的測定、PAK4和Mig-2原核表達蛋白最適包被濃度和HRP-標記的羊抗鼠二抗最佳工作濃度、PAK4和Mig-2原核表達蛋白抗原包被條件的確定、封閉液的確定、封

2、閉時間的確定、被檢血清最佳稀釋度的確定、待檢血清反應(yīng)時間的確定、酶標二抗反應(yīng)時間的確定、底物反應(yīng)時間的確定、間接ELISA方法陰陽臨界值的確定，通過分析得到了一組穩(wěn)定可靠的參考數(shù)據(jù)。建立了適合PAK4和Mig-2單抗制備實驗的間接ELISA篩選方法。　　然后用重組的PAK4和Mig-2質(zhì)粒(以P3XFLAG-CMV-10表達質(zhì)粒為載體)免疫6-8周齡健康BALB/C雌性小鼠，通過細胞融合與克隆，篩選出了能穩(wěn)定分泌PAK4單克隆抗體的雜

3、交瘤細胞2株，分別命名為2D1和3H4；同時也篩選出3株Mig-2單抗細胞株，分別命名為1F8、3C4和4H2株。用間接ELISA方法測得PAK4兩株單抗腹水的效價可達1：1.0×104，Mig-23株單抗的效價介于1：2.4×104～1：4.8×104之間。用間接ELISA方法鑒定，1F8((Mig-2)、3H4(PAK4)、3C4(Mig-2)、4H2(Mig-2)4株單抗均為IgM類抗體，而2D1(PAK4)為IgG類抗體。免疫組