配伍紅花籽油含量測定及其抗氧自由基介導(dǎo)的細(xì)胞損傷作用研究.pdf

1、目的：應(yīng)用氣相色譜（GC）外標(biāo)法測定不同比例配伍紅花籽油（CSSO）中亞油酸（LA）及a﹣亞麻酸（ALA）的含量，建立配伍紅花籽油GC含量測定方法；以H2O2 為刺激源建立人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株（SH-SY5Y）氧化損傷模型；考察不同配伍比例的CSSO 對(duì)氧自由基引起的SH-SY5Y 細(xì)胞氧化損傷的影響，尋找預(yù)防神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷最佳配伍比例及其有效濃度范圍。方法：配制不同比例的CSSO，用亞油酸甲酯及a﹣亞麻酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品為外標(biāo)，測定CSS

2、O中亞油酸及a﹣亞麻酸的含量；通過H2O2 濃度梯度及時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)，建立SH-SY5Y 細(xì)胞H2O2 氧化損傷模型，選擇濃度約為0.7%（V/V）的DMSO 為溶劑，在培養(yǎng)基中設(shè)置不同比例CSSO濃度梯度，與SH-SY5Y 細(xì)胞共培養(yǎng)24h，采用顯微鏡觀察法、MTT 比色法、流式細(xì)胞技術(shù)分別對(duì)細(xì)胞形態(tài)、活力、凋亡率進(jìn)行檢測，統(tǒng)計(jì)分析不同比例CSSO 對(duì)細(xì)胞氧化損傷的預(yù)防作用。結(jié)果：建立了CSSO GC含量測定方法，確定了色譜條件，分別測

3、定了紅花籽油、混酸及3個(gè)比例CSSO中LA和ALA的相對(duì)含量；使用1000μMH2O2 誘導(dǎo)SH-SY5Y 細(xì)胞3 小時(shí)，接近半數(shù)細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)異常，細(xì)胞活力顯著下降（P<0.01），抑制率為46.8%；紅花籽油、混酸及不同比例CSSO 作用細(xì)胞24h后，對(duì)H2O2 引起的SH-SY5Y 細(xì)胞氧化損傷均有不同程度的預(yù)防作用，當(dāng)ALA與LA 比例為1：6.68 時(shí)，效果最好，MTT 結(jié)果顯示，在375μg/ml-750μg/ml 范圍內(nèi)細(xì)胞

4、活力隨濃度升高逐漸增加，濃度為750μg/ml 時(shí)細(xì)胞存活率最高（84.14%），流式細(xì)胞技術(shù)檢測凋亡率與MTT 結(jié)果取得一致。結(jié)論：CSSO GC含量測定方法，有良好的重復(fù)性、精密度及回收率，色譜條件滿足CSSO含量測定要求；以H2O2為刺激源建立了相對(duì)穩(wěn)定、重復(fù)性較好的SH-SY5Y 細(xì)胞氧化損傷模型；當(dāng)CSSO中ALA與LA 比例為1：6.68 時(shí)，對(duì)SH-SY5Y 細(xì)胞氧化損傷的預(yù)防作用相對(duì)較好，具有潛在的預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的臨