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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)觀察人參皂苷Rg3、索拉非尼、奧沙利鉑單藥、兩藥聯(lián)合、三藥聯(lián)合作用對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721增殖、黏附和侵襲的作用,并探討其相關(guān)機(jī)制,為中藥與化療和分子靶向藥物聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)。
方法:
選擇人類肝癌細(xì)胞株SMMC-7721細(xì)胞為研究對(duì)象,通過(guò)增殖抑制實(shí)驗(yàn)法(MTT法)、細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)和免疫細(xì)胞化學(xué)方法系統(tǒng)觀察人參皂苷Rg3、奧沙利鉑、
2、索拉非尼單藥或聯(lián)合對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的抑制黏附、侵襲與轉(zhuǎn)移的作用和表達(dá)CD44V6、MMP-9、VEGF-C基因蛋白的影響。
結(jié)果:
MTT法結(jié)果顯示,人參皂苷Rg3(7.5μg/ml)、索拉非尼(1.25μmol/L)、奧沙利鉑(0.25μg/ml)單藥、兩藥聯(lián)合(人參皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奧沙利鉑,奧沙利鉑+人參皂苷Rg3)、三藥聯(lián)合(人參皂苷Rg3+索拉非尼+奧沙利鉑)對(duì)SMMC-772
3、1細(xì)胞均有抑制增殖的作用,各組藥物在作用24h時(shí)對(duì)細(xì)胞的增殖抑制率均小于15%。(2)用MTT法檢測(cè)黏附于FN上1h、2h的SMMC-7721細(xì)胞,人參皂苷Rg3作用2h與1h比較,黏附抑制率具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。當(dāng)三藥相互兩兩聯(lián)合(人參皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奧沙利鉑,奧沙利鉑+人參皂苷Rg3)時(shí)黏附1h,表現(xiàn)為協(xié)同作用(Q>1.15);黏附2h時(shí),索拉非尼聯(lián)合奧沙利鉑或人參皂苷Rg3,其抑制黏附作用均好于索拉非尼單
4、藥(P<0.05);但無(wú)論是黏附1h還是2h,三藥與兩藥組之間均未見明顯差異(P>0.05)。用MTT法檢測(cè)黏附于Matrigel上1h、2h的SMMC-7721細(xì)胞,當(dāng)三藥相互兩兩聯(lián)合時(shí)黏附1h,表現(xiàn)為協(xié)同作用(Q>1.15);黏附2h時(shí),索拉非尼聯(lián)合奧沙利鉑或人參皂苷Rg3抑制黏附作用均好于索拉非尼(P<0.05),黏附2h時(shí),三藥聯(lián)合比兩藥聯(lián)合體現(xiàn)了更好的抗黏附作用(P<0.01)。(3)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)表明,奧沙利鉑、索拉非尼單藥對(duì)
5、SMMC-7721細(xì)胞的遷移抑制作用較好;奧沙利鉑+人參皂苷Rg3比人參皂苷Rg3單藥抑制遷移作用明顯(P<0.01);奧沙利鉑+索拉非尼比索拉非尼單藥抑制遷移作用明顯(P<0.01);人參皂苷Rg3+索拉非尼比人參皂苷Rg3單藥抑制遷移作用明顯(P<0.01);奧沙利鉑+人參皂苷Rg3表現(xiàn)為相加作用,人參皂苷Rg3+索拉非尼與奧沙利鉑+索拉非尼表現(xiàn)為協(xié)同作用。三藥聯(lián)合抑制遷移作用優(yōu)于人參皂苷Rg3+索拉非尼組及奧沙利鉑+人參皂苷Rg3
6、組(P<0.01)。(4)細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)表明,奧沙利鉑、索拉非尼單藥對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的侵襲抑制作用較好;奧沙利鉑+人參皂苷Rg3比人參皂苷Rg3單藥抑制侵襲作用明顯(P<0.01);奧沙利鉑+索拉非尼比索拉非尼單藥抑制侵襲作用明顯(P<0.01);人參皂苷Rg3+索拉非尼比人參皂苷Rg3單藥抑制侵襲作用明顯(P<0.01);奧沙利鉑+人參皂苷Rg3與奧沙利鉑+索拉非尼表現(xiàn)為相加作用;三藥聯(lián)合比人參皂苷Rg3+索拉非尼組及奧沙利鉑+
7、人參皂苷Rg3抑制侵襲作用明顯(P<0.05)。(5)免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果表明,人參皂苷Rg3可使SMMC-7721細(xì)胞CD44V6及MMP-9表達(dá)減弱(P<0.05),奧沙利鉑可使SMMC-7721細(xì)胞CD44V6、VEGF-C、MMP-9表達(dá)減弱(P<0.05);索拉非尼可使VEGF-C、MMP-9表達(dá)減弱(P<0.05):兩藥聯(lián)合(人參皂苷Rg3+索拉非尼,索拉非尼+奧沙利鉑,奧沙利鉑+人參皂苷Rg3)對(duì)VEGF-C蛋白的影響,明顯
8、高于單藥(P<0.01);對(duì)CD44V6蛋白的影響,索拉非尼+奧沙利鉑及奧沙利鉑+人參皂苷Rg3兩藥組優(yōu)于單藥(P<0.05),人參皂苷Rg3+索拉非尼聯(lián)合優(yōu)于索拉非尼(P<0.05);對(duì)MMP-9蛋白影響方面,索拉非尼+奧沙利鉑優(yōu)于索拉非尼單藥(P<0.05),奧沙利鉑+人參皂苷Rg3優(yōu)于人參皂苷Rg3(P<0.05);三藥聯(lián)合組較兩藥聯(lián)合組使相關(guān)蛋白CD44V6、VEGF-C、MMP-9的表達(dá)減弱更明顯(P<0.01)。
9、 結(jié)論:
(1)人參皂苷Rg3、索拉非尼、奧沙利鉑單藥及兩藥、三藥聯(lián)合對(duì)肝癌SMMC-7721細(xì)胞有一定的抑制黏附、遷移和侵襲的能力;在抑制SMMC-7721細(xì)胞黏附方面,奧沙利鉑與人參皂苷Rg3抗黏附作用較強(qiáng),三藥相互兩兩聯(lián)合時(shí)體現(xiàn)協(xié)同作用,三藥聯(lián)合后抗細(xì)胞黏附作用最大;而在抑制SMMC-7721細(xì)胞遷移侵襲方面,奧沙利鉑與索拉非尼作用較強(qiáng),三藥相互兩兩聯(lián)合時(shí)體現(xiàn)協(xié)同或相加作用,三者聯(lián)合后抗細(xì)胞遷移侵襲作用最強(qiáng)。
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