P38 MAPK抑制劑聯(lián)合g-CSF對(duì)全身γ射線照射小鼠輻射損傷的實(shí)驗(yàn)治療研究.pdf

1、核事故受照人員以及臨床上因各種疾病而接受放射治療的患者，會(huì)出現(xiàn)各種輻射損傷。其中造血系統(tǒng)對(duì)輻射高度敏感，其輻射損傷治療是放射病預(yù)防診治研究中的關(guān)鍵，目前尚無(wú)有效治療手段。因此研發(fā)造血系統(tǒng)輻射損傷預(yù)防和治療藥物具有重要的社會(huì)意義和臨床價(jià)值。
　　 P38絲裂原活化激酶(p38mitogen-activatedproteinkinases，p38MAPK)通路在造血細(xì)胞發(fā)育、衰老和凋亡中具有重要作用，在造血細(xì)胞受照后激活。抑制p38

2、MAPK通路能降低造血祖干細(xì)胞的凋亡，緩解再生性障礙貧血和骨髓增生異常綜合征病人的病情。SB203580(SB)為p38MAPK抑制劑，其作為輻射預(yù)防藥的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　 為探索p38MAPK抑制劑作為小鼠輻射損傷預(yù)防藥物的可行性，我們首先進(jìn)行了小鼠30天生存率實(shí)驗(yàn)。在小鼠接受7.2Gy全身照射前半小時(shí)腹腔注射SB(15mg/kg)一次，隨后隔日給藥，共給藥6次。結(jié)果表明p38MAPK抑制能顯著提高受照小鼠30天生存率。進(jìn)

3、行小鼠6Gy全身照射體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，SB能提高小鼠外周血及單側(cè)股骨有核細(xì)胞計(jì)數(shù)，增強(qiáng)小鼠造血祖細(xì)胞增殖能力，降低骨髓細(xì)胞中活性氧(ROS)水平。本課題首次證實(shí)P38MAPK通路可能作為輻射損傷預(yù)防治療的靶點(diǎn)。
　　 粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocytecolony-stimulatingfactor，G-CSF）是已經(jīng)批準(zhǔn)用于臨床治療腫瘤患者放、化療后白細(xì)胞低下的造血細(xì)胞因子，但臨床上提倡用于治療急性放射病的G-CSF給藥劑

4、量都較小，且持續(xù)給藥時(shí)間長(zhǎng)，用于重度以上急性放射病治療作用不明顯。臨床上在放療后使用G-CSF治療發(fā)現(xiàn)，G-CSF能夠誘發(fā)骨髓細(xì)胞功能耗竭。因此本課題進(jìn)一步開(kāi)展了SB聯(lián)合G-CSF對(duì)不同劑量(2,4，6Gy)γ射線全身照射小鼠造血免疫系統(tǒng)輻射損傷的治療作用研究。
　　 SB治療組小鼠于照射后24小時(shí)第1次腹腔注射給藥，以后隔天注射1次，共給藥5次。G-CSF治療組小鼠于照射后2小時(shí)和6小時(shí)后腹腔注射給藥，劑量為1μg/只，以后每

5、天注射兩次，共6天。聯(lián)合用藥組小鼠同時(shí)腹腔注射兩種藥物。照射組和未照射組小鼠腹腔注射等體積的含30％DMSO的無(wú)菌對(duì)照溶液。
　　 在小鼠接受7.2Gy全身照射后觀察生存率，發(fā)現(xiàn)SB與G-CSF聯(lián)合應(yīng)用能顯著提高小鼠生存率。利用粒-巨噬細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)(colonyformingunits-granulocyte-macrophage,CFU-GM)對(duì)小鼠造血祖細(xì)胞功能進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥組小鼠骨髓細(xì)胞的克隆形成能力均高于SB

6、或者G-CSF單獨(dú)用藥組。利用鵝卵石樣區(qū)域形成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)(cobblestonearea-formingcell，CAFC)檢測(cè)4Gy受照小鼠骨髓造血干細(xì)胞的功能，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥組小鼠第4周CAFC數(shù)高于照射組，SB或者G-CSF單獨(dú)用藥組。
　　 對(duì)SB輻射損傷保護(hù)作用機(jī)制進(jìn)行初步探索。檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞ROS水平，發(fā)現(xiàn)SB，G-CSF單獨(dú)給藥，以及聯(lián)合給藥組小鼠骨髓細(xì)胞ROS水平均低于照射組小鼠。體外實(shí)驗(yàn)在發(fā)現(xiàn)SB提高受照小鼠骨髓

7、細(xì)胞克隆能力的基礎(chǔ)上，利用MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路PCR芯片篩選出p38在輻射損傷中16個(gè)可能調(diào)節(jié)的下游靶基因。SB除抑制MAPK信號(hào)通路外，還能調(diào)節(jié)CDK4/6，CyclinD2等周期蛋白及一些轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)來(lái)起作用。
　　 綜上所述，首次發(fā)現(xiàn)SB作為預(yù)防藥物預(yù)防輻射損傷有一定療效，而與G-CSF聯(lián)合后，可緩解G-CSF的副作用，對(duì)輻射損傷尤其4Gy全身照射小鼠具有更好的治療效果，研究結(jié)果為開(kāi)發(fā)臨床放射疾病預(yù)防和治療新方法提供了實(shí)