AQP4基因多態(tài)性與視神經(jīng)脊髓炎遺傳易感性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：初步探討AQP4外顯子區(qū)域基因多態(tài)性與我國視神經(jīng)脊髓炎（NMO）患者遺傳易感性的關(guān)系，根據(jù)NMO患者單核苷酸多態(tài)性（SNP）位點(diǎn)的相關(guān)信息，通過我們建立的不同位點(diǎn)突變的NMO-IgG檢測細(xì)胞株進(jìn)行檢測，從而對不同研究組總體的NMO-IgG抗體滴度水平的差異來分析不同位點(diǎn)的突變可能產(chǎn)生的相應(yīng)的蛋白質(zhì)的功能變化，進(jìn)而從AQP4基因水平這一角度來分析探討NMO的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：對36例符合入選標(biāo)準(zhǔn)的NMO患者以及34例多發(fā)性

2、硬化（MS）、30例腦梗死（CI）、30例正常對照組（NC）為研究對象。用常規(guī)酚/氯仿法從患者及正常對照組全血標(biāo)本中提取基因組 DNA，應(yīng)用 PCR擴(kuò)增 AQP4外顯子區(qū)基因（包括AQP4-exon1和AQP4-exon5），再對PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化及正反雙向測序，再通過與GeneBank公布的人類AQP4基因序列比較，尋找陽性突變位點(diǎn)，并比較各陽性突變位點(diǎn)在NMO、MS、CI、正常對照組中突變率的差異。后通過特異性的定點(diǎn)誘變技術(shù)對pEG

3、FP-N1-AQP4質(zhì)粒誘導(dǎo)相應(yīng)位點(diǎn)的突變生成相應(yīng)的突變AQP4質(zhì)粒，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法,將相應(yīng)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入HEK-293T細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)后進(jìn)行NMO-IgG抗體滴度的檢測。應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)視神經(jīng)脊髓炎NMO組其5號外顯子區(qū)域有單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)4個(gè)，突變的位點(diǎn)為 C9414T、G9416C、A9458C、C9524A，而多發(fā)性硬化組，腦梗死組及正常對照組均未發(fā)現(xiàn)相應(yīng)的SNP位點(diǎn)，同