Th1-Th2細(xì)胞因子及1，25-二羥維生素D3對(duì)樹突狀細(xì)胞的影響以及在哮喘氣道炎癥中作用的研究.pdf

1、過敏性哮喘是以哮喘個(gè)體氣道慢性炎癥過程為主要特征，由免疫反應(yīng)所致的支氣管疾患。哮喘的炎癥與氣道粘膜內(nèi)T細(xì)胞過度活化有關(guān)。在過敏性哮喘，活化的T淋巴細(xì)胞以Th2細(xì)胞為主。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在哮喘氣道內(nèi)出現(xiàn)大量樹突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)，在哮喘氣道局部T淋巴細(xì)胞活化中起主要的作用，它能將局部沉積的抗原轉(zhuǎn)化為局部T細(xì)胞活化的信號(hào)。定居在非淋巴組織的DC必須被活化后才能開始分化和成熟。樹突狀細(xì)胞的成熟以MHCⅡ分布，抗原呈遞能

2、力、共刺激分子的表達(dá)等復(fù)雜變化和粘附分子重新分布為主要特征。樹突狀細(xì)胞成熟很可能受微環(huán)境信號(hào)控制。但是，調(diào)節(jié)DC細(xì)胞周期，生存期和功能活性的機(jī)制和因素知道甚少。各種細(xì)胞因子、趨化因子和化學(xué)介質(zhì)，控制著DC的運(yùn)動(dòng)、生存和功能活性，但是這些效應(yīng)背后詳細(xì)的生物化學(xué)機(jī)制還不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)分兩部分探討Th1/Th2細(xì)胞因子及1,25-二羥維生素D3對(duì)樹突狀細(xì)胞功能和表型影響以及過繼回輸DC對(duì)哮喘模型小鼠氣道炎癥的作用。 本研究第一部分

3、在體外用GM-CSF誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞誘分化為DC,即骨髓來源的樹突細(xì)胞(Bonemarrow-deriveddendriticcell,BMDC)，通過流式細(xì)胞儀測(cè)定其表面分子CD11c和CD80以及MHCⅡ的表達(dá)，明確BMDC的純度和表型特點(diǎn)，然后再用不同劑量(10ng、20ng、40ng、60ng和80ng)IL-4和IFN-γ分別與BMDC共培養(yǎng)48h，測(cè)定各劑量組BMDC的表型，觀察其前后變化情況。接著，用80ng組BMDC與O

4、VA致敏和激發(fā)哮喘模型小鼠脾臟分離的T淋巴細(xì)胞加濃度為10ug/mlOVA共培養(yǎng)72h，收集培養(yǎng)上清液，采用ELISA測(cè)定IL-4和FN-γ以及IL12分泌水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：體外誘導(dǎo)獲得的BMDC表達(dá)CD11C、MHCⅡ和CD80分別為77.50％、30.12％和27.34％,具有未成熟樹突狀細(xì)胞的表型，即：CD11ChighMHCⅡlowCD80low。在不同劑量的IL-4和IFN-γ分別刺激后,BMDC表面分子CD80和MHCⅡ均顯著

5、增加(p＜0.01)，且呈劑量依賴性。80ngIL-4組BMDC與T細(xì)胞相互作用后，與對(duì)照相比,IL-4水平顯著增加增加(p＜0.01)，而IFN-γ和IL-12明顯降低(p＜0.01)。80ngIFN-γ組BMDC與T細(xì)胞相互作用后，與對(duì)照相比,IL-4、IFN-γ和IL12水平均明顯增加(p＜0.01)。以上結(jié)果提示：IL-4、IFN-γ均能活化DC,促進(jìn)DC的成熟；IL-4活化后的DC以啟動(dòng)Th2免疫反應(yīng)為主；IFN-γ活化后的D

6、C可啟動(dòng)Th1和Th2免疫反應(yīng)。 另外，在培養(yǎng)BMDC開始加入1，25-二羥維生D3，在培養(yǎng)第8天加入OVA10ug/ml，通過流式細(xì)胞儀測(cè)定BMDC表面分子CD11c和CD80以及MHCⅡ的表達(dá)，用ELSIA檢測(cè)BMDC分泌IL-10和IL-12的水平。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與1，25-二羥維生素D3未處理組相比,CD80和MHCⅡ表達(dá)均顯著降低(p＜0.01)，而CD11c變化不明顯,IL-10水平明顯增加而IL-12明顯降低。以

7、上結(jié)果提示：1，25-二羥維生素D3可降低BMDC表面分子MHCⅡ和CD80表達(dá)，抑制BMDC的成熟，使之分泌IL-10增加而IL-12降低。 本研究第二部分將IL-4、IFN-γ和1，25-二羥維生素D3處理BMDC裝載OVA后經(jīng)支氣管過繼回輸?shù)絆VA致敏小鼠氣道，再用OVA激發(fā)，觀察哮喘氣道炎癥發(fā)生情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組比較,IL-4和IFN-γ處理組可出現(xiàn)哮喘典型的病理改變,BALF中EOS顯著高于空白對(duì)照組(p

8、＜0.01)，且與DC回輸組和哮喘組結(jié)果相似，而1,25-二羥維生素D3處理組小鼠肺組織未見哮喘典型的病理改變,BALF中EOS顯著低于DC回輸組和哮喘組(p＜0.01)，且與空白對(duì)照組相似。以上結(jié)果提示：IL-4和IFN-γ處理后DC可誘發(fā)哮喘，進(jìn)一步證實(shí)其在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用1，25-二羥維生素D3處理后DC過繼回輸小鼠后能避免哮喘的發(fā)生，可能與IL-10水平增加和IL-12降低有關(guān)。 總之，通過本研究，我們可以得出以下結(jié)

9、論：1)IL-4可以促進(jìn)DC成熟，從誘導(dǎo)Th2型反應(yīng)途徑參與哮喘氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展。2)IFN-γ呈劑量依賴性的促進(jìn)DC成熟；IFN-γ處理后DC既可啟動(dòng)Th1反應(yīng)，也可促進(jìn)Th2反應(yīng)；IFN-γ活化DC也能誘導(dǎo)哮喘氣道炎癥反應(yīng)，提示IFN-γ在哮喘發(fā)病中的作用可能具有多樣性。3)將1,25-二羥維生素D3處理的DC過繼致敏小鼠可誘導(dǎo)對(duì)抗原特異性的免疫耐受，避免哮喘樣氣道炎癥反應(yīng)的發(fā)生。4)DC在誘導(dǎo)哮喘對(duì)抗原免疫耐受中起到關(guān)鍵的作用，