四川甘孜州藏雞沙門(mén)氏菌的分離鑒定、耐藥基因及可移動(dòng)遺傳元件的檢測(cè).pdf

1、藏雞主要分布在青藏高原海拔2200～4100m的半農(nóng)半牧區(qū)，是我國(guó)高海拔地區(qū)養(yǎng)雞業(yè)的重要品種資源。藏雞沙門(mén)氏菌病時(shí)有發(fā)生，耐藥性日益突出，給藏雞養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了極大的威脅。
　　試驗(yàn)采集四川甘孜州4個(gè)藏雞養(yǎng)殖場(chǎng)送檢的28只疑似患沙門(mén)氏菌病藏雞的心、肝、脾、肺、腎、卵巢（或睪丸）和腸內(nèi)容物，總計(jì)196份樣本，經(jīng)細(xì)菌分離純化、生化試驗(yàn)、PCR鑒定和血清型鑒定，共獲得42株藏雞沙門(mén)氏菌，其樣本檢出率為21.43％(42/196)。42株沙門(mén)

2、氏菌共鑒定出6種血清型，其中鼠傷寒沙門(mén)氏菌（14株）、雞傷寒沙門(mén)氏菌（10株）、雞白痢沙門(mén)氏菌（8株）和腸炎沙門(mén)氏菌（6株）為主要的血清型。
　　采用CLSI(2013)推薦的瓊脂紙片擴(kuò)散法(K-B)對(duì)42株藏雞沙門(mén)氏菌進(jìn)行21種抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)。結(jié)果表明，藏雞沙門(mén)氏菌對(duì)21種抗菌藥物均表現(xiàn)不同程度耐藥。其中，對(duì)阿莫西林(90.48％)、羧芐西林(90.48％)的耐藥率最高，其次為氨芐西林(88.10％)、利福平(88.10％

3、)、復(fù)方新諾明(76.19％)、四環(huán)素(69.05％)、多西環(huán)素(59.52％)、氟苯尼考(54.76％)、頭孢唑啉(47.62％)、卡那霉素(47.62％)和鏈霉素(42.86％)，對(duì)慶大霉素(7.14％)、丁胺卡那(2.38％)的耐藥率最低。41株分離菌對(duì)3類以上的抗菌藥物耐藥，多重耐藥率為97.62％(41/42)。
　　應(yīng)用PCR技術(shù)對(duì)42株藏雞沙門(mén)氏菌進(jìn)行耐藥基因檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，分離株共檢出26種耐藥基因，其中β-內(nèi)酰胺

4、類耐藥基因blaTEM、blaCTX-M、blaSHV、blaOXA、blaPSE和blaCMY-2，以blaTEM檢出率最高(90.48％);氨基糖苷類耐藥基因addA1、addA2、addB、AacC2、aac(3)-Ⅲ和Aph(3')-Ⅱa，以addA2檢出率最高(85.71％);四環(huán)素類耐藥基因tetA、tetB、tetC，以tetA檢出率最高(83.33％);氯霉素類耐藥基因catA1、floR、CmlA，以CmlA檢出率最高

5、(57.14％);磺胺類耐藥基因sul1、sul2，以sul2檢出率最高(83.33％);喹諾酮類耐藥基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ⅰb-cr、oqxA、oqxB，以aac(6')-Ⅰb-cr檢出率最高(59.52％)。
　　應(yīng)用PCR技術(shù)對(duì)41株藏雞多重耐藥沙門(mén)氏菌進(jìn)行可移動(dòng)遺傳元件檢測(cè)。結(jié)果共檢出traA、trbC、merA、tnpA/Tn3、tnpU、tnp513、tn1721、IS26和intI19種可

6、移動(dòng)遺傳元件，其中traA、trbC為國(guó)內(nèi)首次從沙門(mén)氏菌中檢出。每株菌檢出3～8種可移動(dòng)遺傳元件。通過(guò)質(zhì)粒接合試驗(yàn)驗(yàn)證了多重耐藥沙門(mén)氏菌中的耐藥基因和可移動(dòng)遺傳元件具有可移動(dòng)性。隨機(jī)將14株檢測(cè)到耐藥基因和可移動(dòng)遺傳元件的多重耐藥沙門(mén)氏菌進(jìn)行質(zhì)粒接合試驗(yàn)，結(jié)果共獲得8株接合子，其接合成功率為57.14％(8/14)。
　　結(jié)論:196份藏雞樣本中，沙門(mén)氏菌樣本檢出率為21.43％(42/196);42株藏雞沙門(mén)氏菌分離株共6種血清