抗人腫瘤內皮細胞標志物8（TEM8）單克隆抗體的制備及其蛋白表達產物在部分腫瘤和正常組織中的分布研究.pdf

1、復旦大學碩士學位論文抗人腫瘤內皮細胞標志物8（TEM8）單克隆抗體的制備及其蛋白表達產物在部分腫瘤和正常組織中的分布研究姓名：李華申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學指導教師：朱虹光20030518P r e p a r a t i o n o f a n t i —h u m a nT u m o r E n d o t h e l i a lM a r k e r 8 S p e c i f i cM o n o c l o n a l

2、A n t i b o d y a n d S t u d y o f D i s t r i b u t i o no f T E M 8 P r o t e i n i nN o r m a l a n d M a l i g n a n t h u m a n T i s s u e sA b s t r a c to b j e c t i v e T op r e p a r ea n t i —h u m a nt u m

3、o re n d o t h e l i a lm a r k e r8 m o n o c l o n a la n t i b o d y ：T oo b s e r v e t h e d i s t r i b u t i o n o f T E M 8p r o t e i n i n s o m e n o r m a l a n dm a l i g n a n t h u m a n t i s s u e sM e t

4、 h o d s L i g a t eh u m a n T E M 8 c D N A i n t ot h ep E T 3 2 b v e c t o ra n dt r a n s f o r mE ．c o l is t r a i nB L 2 1 ( D E 3 ) w i t h a l i q u o t so f t h el i g a t i o nr e a c t i o na n d I P T G i

5、n d u c e dt h ec o l o n y o f E ．c o l ic o n t a i n i n g t h e r e c o m b i n a n t p l a s m i d t oe x p r e s s t h e t a r g e t p r o t e i n ．T h eT E M 8 p r o t e i np u r i f i e db yi m m o b i l i z e dN

6、 i 2 + a b s o r p t i o nc h r o m a t o g r a p h yw a su s e dt oi m m u n i z ef e m a l eB a l b ／cm i c e ．S p l e e nc e l l sw e r ef u s e dw i t hS P 2 ／0m o u s em y e l o m ac e l l su s i n gs t a n d a r dh

7、 y b r i d o m at e c h n i q u e ．H y b r i d o m a sw e r es c r e e n e df o rs p e c i f i ca n t i b o d y p r o d u c t i o n b y t h e E L I S A a n d W e s t e r n B l o t ．P o r t i o n so f e a c h t i s s u ew

8、 e r e f i x e di n1 0 ％n e u t r a lb u f f e r e df o r m a l i na n d e m b e d d e d i np a r a f f i n ．S p e c i m e n sw e r e c u ti n t o4 u ms e c t i o n s ．I r n m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i

9、n gw a sp e r f o r m e db yt h e a v i d i n —b i o t i n —p e r o x i d a s ec o m p l e x t e c h n i q u e ．N o n s p e c i f i cb i n d i n gs i t e sw e r e b l o c k e d w i t hn o r m a lh o r s e s e r u m ．H y

10、b r i d o m a s u p e m a n t w e r e u s e d a s a p r i m a r y a n t i b o d y a n dd i a m i n o b e n z i d i n e a st h e c h r o m o g e n ．C o m p l e t em e d i u m w a s u s e d a sa n e g a t i v e c o n t r 0

11、 1 ．R e s u l t s W ea c q u i r e d 8 h y b r i d o m a sp r o d u c i n gt h e s p e c i f i c m o n o c o l o n a la n t i b o d yo fi n t e r e s t ．B e s i d e st h ee n d o t h e l l a l c e l l s o fc o l o r e c

12、t a lc a r c i n o m a 。T E M 8p r o t e i nw a sa l s od e t e c t e di no t h e rc e l l ss u c ha sm a l i g n a n ta n dn o r m a le p i t h e l i u mo fc o ] o r e c t u m a n d p r o s t a t e ，s q u a m o u s e p

13、i t h e l i u mc e l l so f s k i n a n ds m o o t h m u s c l e c e l l so fc o l o r e c t u m ．C o n c l u s i o n s A n t i —T E M 8 S p e c i f i c m o n o c l o n a l a n t i b o d y w a s s u c c e s s f u l l yd

14、e v e l o p e d ．B e s i d e st h ee n d o t h e l i a lc e l l so f c o l o r e c t a lc a r c i n o m a ，T E M 8p r o t e i n ，i se x p r e s s e d i n an u m b e r o ft i s s u e s s u c h a s n o r m a l c o l o r e

15、c t u m a n dp r o s t a t e ．T h ee x p r e s s i o nl e v e lo f m R N A a n d p r o t e i ni sn o ta l w a y sc o n s i s t e n t e a c h o t h e r ．K e y w o r d s t u m o r e n d o t h e l i a l m a r k e r 8 , m o