基于微透析-液質(zhì)聯(lián)用新技術(shù)研究丹參腦及血漿藥代動(dòng)力學(xué)特性.pdf

1、冠心丹參方是2005版藥典收錄的一個(gè)經(jīng)典方，由君藥丹參、臣藥三七、佐使藥降香組成，主要藥理作用為改善供血、保護(hù)心肌缺血、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、改善脂質(zhì)代謝以及抗血栓的形成，臨床研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)腦缺血也有一定保護(hù)作用。大量研究集中于丹參腦保護(hù)作用藥效學(xué)方面，而對(duì)丹參發(fā)揮腦保護(hù)作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)則不是很清晰，對(duì)其主要有效成分的腦內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特性研究較少。
　　本課題選擇丹參中原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸 A、丹酚酸 B、隱丹參酮、丹參酮ⅡA共6

2、種主要有效成分，建立其在大鼠腦勻漿、腦微透析液及血漿中高效、靈敏的LC-MS/MS分析方法。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分采用SD大鼠，通過腦微透析與自動(dòng)采血技術(shù)聯(lián)用，腦微透析探針定位于大鼠側(cè)腦室，自動(dòng)采血儀連接到頸靜脈，同時(shí)采集腦微透析及血液樣品。檢測(cè)收集的生物樣品中藥物濃度，篩選能夠跨越血腦屏障進(jìn)入腦內(nèi)的成分，繪制這些成分的腦及血漿藥時(shí)曲線。采用 WinNonlin藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)；計(jì)算㏒BB值，比較6種成分在不同時(shí)刻的腦血分配系數(shù)。進(jìn)一

3、步研究其腦內(nèi)及血漿藥代動(dòng)力學(xué)特性，比較其跨越血腦屏障的能力。大鼠股靜脈分別注射 PCA、PAL、SAA、SAB、CTS、TSⅡA，給藥劑量依次為：25、20、4、15、10、25 mg·kg-1。股靜脈分別給予丹參主要有效成分20 mg·kg-1，在10、20、30、40、50、60、70、80、90 min收集腦微透析樣品，5、10、20、30、40、50、60、70、80、90 min收集血液樣品。采用Agilent Eclipse

4、 Plus-C18色譜柱（2.1×50 mm,3.5μm），梯度洗脫。采用電噴霧電離源（ESI），掃描方式為MRM，正離子模式下檢測(cè)的離子對(duì)（m/z）為：297.4/254.3（隱丹參酮），295.5/249.3（丹參酮ⅡA），285.2/154.0（內(nèi)標(biāo)地西泮）；負(fù)離子模式下檢測(cè)的離子對(duì)（m/z）為：154.3/153.1（原兒茶酸），137.3/108（原兒茶醛），493.0/295.2（丹酚酸 A），718.0/520.0（丹酚酸

5、 B），321.4/152.3（內(nèi)標(biāo)氯霉素）。腦勻漿、血漿樣品經(jīng)過液液萃取處理， LC-MS/MS檢測(cè)。微透析樣品加入內(nèi)標(biāo)后檢測(cè)。測(cè)定各成分的濃度，經(jīng)回探針收率校正，計(jì)算藥物真實(shí)濃度。結(jié)果顯示，建立的檢測(cè)方法，血漿及腦勻漿中隱丹參酮的線性范圍為0.15~1000 ng·mL-1，定量下限為0.15 ng·mL-1；丹參酮ⅡA、原兒茶酸、原兒茶醛的線性范圍為0.625~1000 ng·mL-1，定量下限為0.625 ng·mL-1；丹酚酸

6、A的線性范圍為1.25~1000 ng·mL-1，定量下限為1.25 ng·mL-1；丹酚酸B的線性范圍為2.5~1000 ng·mL-1，定量下限為2.5 ng·mL-1。方法靈敏可靠，可用于檢測(cè)腦及血漿樣品。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，6種成分入腦濃度存在較大差異，40 min時(shí)各成分的腦血比值（㏒BB=C腦/C血）為CTS>TSⅡA>PAL>PAC>SAA≈SAB。90 min時(shí)各成分的㏒BB為TSⅡA>CTS>PAC>PAL≈SAA≈