血管基膜衍生多功能肽治療腫瘤主要藥效學(xué)及信號蛋白磷酸化比較研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文血管基膜衍生多功能肽治療腫瘤主要藥效學(xué)及信號蛋白磷酸化比較研究姓名：曹建國申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：鄧漢武20060501中南大學(xué)博t學(xué)位論文中文摘要第一部分重組血管基膜衍生多功能肽抗血管新生活性及信號蛋白磷酸化比較研究方法體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮(HUVEC121細(xì)胞，采用MTr法檢測rVBMDMP對刪、，EC一12細(xì)胞增殖活性的影響；臺盼藍(lán)染色細(xì)胞計數(shù)法測定其對HUVEC12細(xì)胞生長的影響；內(nèi)皮管結(jié)構(gòu)形

2、成實驗觀測其對內(nèi)皮細(xì)胞管結(jié)構(gòu)形成能力的影響；PI染色流式細(xì)胞術(shù)分析其對mⅣEc—12細(xì)胞凋亡率的影響；吖啶橙染色熒光顯微鏡觀察rVBMDMP作用后內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；劃痕法測定其對HUVEC12細(xì)胞遷移能力的影響；制備全細(xì)胞抽提液，采用信號傳導(dǎo)抗體芯片TMHypromatrix檢測rVBMDMP處理前后HUVEC12細(xì)胞信號蛋白的酪氨酸(絲氨酸及蘇氨酸1磷酸化水平變化。結(jié)果MTT法、臺盼藍(lán)染色細(xì)胞計數(shù)法結(jié)果顯示：rVBMDMP能顯

3、著抑制HuvEc—12細(xì)胞增殖和生長，其作用呈濃度和時間依賴性。rvBMDMP(10uM)作用96h時，HuVEC—12細(xì)胞的活細(xì)胞數(shù)僅為溶酶對照組的50％。內(nèi)皮管結(jié)構(gòu)形成實驗結(jié)果表明，rVBMDMP能顯著降低內(nèi)皮細(xì)胞管結(jié)構(gòu)數(shù)目(176743055vs5033430551。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，rVBMDMP處理后內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性增加，其中rVBMDMP(1O洲)組凋亡率高達(dá)144l％。吖啶橙染色熒光顯微鏡觀察，rVBMDMP作

4、用后的內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài)學(xué)改變。劃痕法結(jié)果表明，rVBMDMP對HUVEC12細(xì)胞遷移能力無明顯影響。抗體芯片檢測結(jié)果顯示，與10％小牛血清刺激增殖的HUVEC12細(xì)胞相比較，rVBMDMP(10曲I)處理30分鐘后，HUVEC—12細(xì)胞磷酸化水平升高的蛋白包括：整合蛋白Qv、pl和B3亞單位，生長因子結(jié)合蛋白(Grb21，細(xì)胞『日J(rèn)粘附分子(PECAM1、ICAM1)，細(xì)胞凋亡執(zhí)行分子Caspase3，細(xì)胞支架和緊密連接蛋白(C

5、onnexin43、Ezrin、Paxillin、ZO—l、PAR一3)，非受體酪氨酸激酶Axl、Csk和轉(zhuǎn)錄因子ATF一3、p—ArF一3、Ets—l／2，死亡受體包括DR3、DR4、DR5、受體相互作用蛋白(RIP)，干擾素相關(guān)因子(IRFl、IRF2)；磷酸化水平降低的蛋白包括：周期調(diào)控蛋白(CyclinA、CyclinB、CyclinE、CDK2)，上皮生長因子受體(EGFR、pEGFR)，血管內(nèi)皮生長因子受體VEGFRI，生存