還原型谷胱甘肽對多柔比星抗人肝癌細胞株HepG2效果影響.pdf

1、一、目的：
　　1.體外實驗研究抗氧化劑還原型谷胱甘肽(GSH)對多柔比星（DOX）抗人肝癌細胞株 HepG2細胞株增殖及凋亡的影響；2.探索多柔比星聯(lián)合 GSH誘導 HepG2細胞凋亡后NF-κB p65、bcl-2表達及其意義；3.為個體化護肝治療的理念提供理論依據(jù)。
　　二、方法：
　　1．采用MTT法，檢測不同濃度多柔比星單藥及聯(lián)合還原型谷胱甘肽，對HepG2細胞生長的影響。
　　2.實時熒光定量PCR方

2、法檢測不同濃度多柔比星單藥及聯(lián)合還原型谷胱甘肽作用于HepG2細胞后NF-κBp65mRNA表達
　　3．Western blotting檢測不同濃度多柔比星單藥及聯(lián)合還原型谷胱甘肽作用人肝癌細胞株HepG2細胞后NF-κB p65及Bcl-2的表達。
　　4．流式細胞儀檢測不同濃度多柔比星單藥及聯(lián)合還原型谷胱甘肽作用HepG2細胞后的細胞凋亡率。
　　三、結果：
　　1.MTT法測定生長抑制率：
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3、）多柔比星濃度為0.125ug/ml、0.25ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml時，作用24h、48h、72h均能抑制HepG2細胞的增殖，24h抑制率分別為9.35％±0.009、12.67%±0.037、14.28%±0.028、17.45%±0.013、21.46%±0.045；48h抑制率分別為22.48%±0.047、35.15%±0.049、41.55%±0.02、56.52%±0.069、65.61%

4、±0.035；72h抑制率分別為34.15%±0.038、44.41%±0.050、52.08%±0.042、77.96%±0.025、85.73%±0.028。抑制率具有時間劑量依賴性。相同藥物濃度下不同時間點兩組間抑制率有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；在相同時間點下不同濃度兩組間抑制率有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)
　　（2）不同濃度多柔比星（0.125ug/ml、0.25ug/ml、0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml）

5、分別和還原型谷胱甘肽（100ug/ml）聯(lián)合，作用24h、48h、72h均能抑制HepG2細胞的增殖，但各組抑制率較單藥有所降低。24h抑制率分別為5.33%±0.022、10.55%±0.013、11.97%±0.018、15.12%±0.006、16.92%±0.015、48h抑制率分別為11.76%±0.011、18.90%±0.027、26.38%±0.063、34.85%±0.018、37.90%±0.006；72h抑制率分別

6、為14.85%±0.030、25.20%±0.075、34.73%±0.029、39.13%±0.018、48.23%±0.036.
　?。?）不同濃度DOX單藥抑制率高于不同濃度DOX與100ug/ml GSH聯(lián)合處理細胞24h、48h、72h后抑制率，均具有差異性（p<0.05）。
　　2.流式細胞儀檢測DOX2ug/ml、及DOX2ug/ml聯(lián)合GSH100ug/ml處理HepG2細胞24h后，觀察細胞凋亡率。多柔比星

7、單藥組細胞凋亡率為16.03±0.006%，聯(lián)合組細胞細胞凋亡率為29.07±0.007%，兩組具有統(tǒng)計學差異（P<0.05）
　　3. RT-PCR結果顯示，不同濃度DOX單藥及聯(lián)合GSH100ug/ml處理HepG2細胞24h后，兩組NF-κB p65mRNA表達具有顯著差異（P<0.05）
　　4. Western blotting結果顯示：DOX2ug/ml、及 DOX2ug/ml聯(lián)合 GSH100ug/ml處理He