硫化氫對(duì)蝮蛇毒致大鼠急性肺損傷肺組織細(xì)胞凋亡的影響及可能機(jī)制.pdf

1、目的：
　　通過(guò)觀察增減機(jī)體內(nèi)H2S的含量對(duì)蝮蛇毒致SD大鼠急性肺損傷時(shí)肺組織細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)通路蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3表達(dá)的影響，探討H2S/CSE體系對(duì)蝮蛇毒致急性肺損傷時(shí)肺組織細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。
　　方法：
　　健康清潔級(jí)SD（sprague-dawley）雄性大鼠36只，采用完全隨機(jī)分組法分6組，每組6只：生理鹽水空白對(duì)照組（N組，注射用生理鹽水2ml/kg），蛇

2、毒組（C組，蛇毒1.50mg/kg），蛇毒+低劑量 NaHS組（L組，蛇毒1.50mg/kg+NaHS0.78mg/kg），蛇毒+中劑量 NaHS組（M組，蛇毒1.50mg/kg+NaHS1.56mg/kg），蛇毒+高劑量 NaHS組（H組，蛇毒1.50mg/kg+NaHS3.12mg/kg），蛇毒+PPG組（P組，蛇毒1.50mg/kg+PPG30mg/kg）。按照實(shí)驗(yàn)分組分別予以腹腔內(nèi)注射生理鹽水及腹蛇毒素，3小時(shí)后按分組分別腹腔內(nèi)

3、注射N(xiāo)aHS及PPG。于注射蝮蛇毒素6小時(shí)后處死大鼠，采集肺組織標(biāo)本。病理切片HE染色光鏡下評(píng)估肺組織病理學(xué)變化并進(jìn)行肺損傷病理評(píng)分，流式細(xì)胞術(shù)測(cè)各組肺組織細(xì)胞凋亡率，免疫組織化學(xué)法測(cè)Bcl-2和Bax蛋白分布和表達(dá)，免疫印跡法測(cè)Caspase-9和Caspase-3蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.肺組織病理學(xué)改變
　?。?）大體觀：N組肺組織顏色呈淡粉紅色，表面光滑，無(wú)出血點(diǎn)，無(wú)水腫。C組可見(jiàn)肺組織明顯充血水腫，外觀

4、呈紅色，見(jiàn)大片的暗紅色出血灶。L組、M組以及H組見(jiàn)肺組織充血水腫依次緩解。P組損傷程度較C組嚴(yán)重，肺組織外觀呈紅色，大片新鮮出血病灶，肺組織嚴(yán)重充血水腫。
　?。?）鏡下觀：N組肺泡無(wú)水腫及透明膜形成，肺間質(zhì)不增寬，肺泡腔及肺間質(zhì)未見(jiàn)紅細(xì)胞漏出及炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，無(wú)肺不張。C組可見(jiàn)肺泡結(jié)構(gòu)明顯紊亂、破壞，肺泡結(jié)構(gòu)不完整，明顯肺泡水腫，大量透明膜形成，肺間質(zhì)明顯增厚，肺間質(zhì)及肺泡大量紅細(xì)胞及粒細(xì)胞侵潤(rùn)，大面積肺不張，與N組比較，其肺損傷

5、評(píng)分明顯升高（P<0.01）。L組與C組比較，肺組織損傷尚未見(jiàn)明顯改善，肺損傷評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。M組及H組肺組織結(jié)構(gòu)較C組破壞程度明顯減輕，肺泡及肺間質(zhì)水腫減輕，紅細(xì)胞和粒細(xì)胞滲出明顯減少，透明膜減少，肺不張面積減小，肺損傷評(píng)分均明顯降低（P<0.01）。P組肺組織損傷程度較C組更嚴(yán)重，表現(xiàn)為大面積肺泡水腫，大量透明膜形成，肺泡結(jié)構(gòu)大面積破壞，肺間質(zhì)增厚，大量紅細(xì)胞和粒細(xì)胞滲出，大面積肺不張，肺損傷評(píng)分明顯升高（P<0.05）。

6、　　2.細(xì)胞凋亡率的變化
　　與N組比較，其余各處理組肺組織細(xì)胞凋亡率均明顯升高（P<0.01）。與C組比較，L、M、H組細(xì)胞凋亡率均明顯下降（P<0.01）；P組肺組織凋亡率明顯升高（P<0.01）。
　　3.肺組織Bax和Bcl-2蛋白的分布和表達(dá)以及Bcl-2/Bax比值的變化
　　Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性被染色呈棕黃色，主要表達(dá)于肺泡上皮和支氣管上皮，于血管內(nèi)皮細(xì)胞及炎癥細(xì)胞內(nèi)亦有表達(dá)。N組可見(jiàn)少量Bax

7、和Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)。與N組比較，C組Bcl-2蛋白的表達(dá)增強(qiáng)（P<0.01），Bax蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01），Bcl-2/Bax比值明顯降低（P<0.01）。與C組比較， L、M、H組Bcl-2蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P<0.01）；而M、H組Bax蛋白表達(dá)則明顯減少（P<0.01）；L、M、H組Bcl-2/Bax比值明顯升高（P<0.01或P<0.05）。與C組比較，P組 Bcl-2蛋白表達(dá)明顯減弱（P<0.05），Bax蛋

8、白表達(dá)明顯增加（P<0.05），Bcl-2/Bax比值明顯下降（P<0.05）。
　　4.肺組織Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)的變化
　　N組有Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)。與N組比較，C組Caspase-3及Caspase-9蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.01）。與C組比較，L、M、H組 Caspase-3蛋白表達(dá)均明顯減弱（P<0.01），M、H組Caspase-9蛋白表達(dá)亦明顯減弱（P<0

9、.01）；P組Caspase-3和Caspase-9蛋白表達(dá)均明顯增強(qiáng)（P<0.01或P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.蝮蛇毒可以導(dǎo)致SD大鼠產(chǎn)生急性肺損傷。
　　2.蝮蛇毒致SD大鼠急性肺損傷時(shí)，肺組織細(xì)胞凋亡率明顯上升。
　　3. H2S可以抑制蝮蛇毒致SD大鼠急性肺損傷時(shí)肺組織細(xì)胞凋亡，對(duì)急性肺損傷起到保護(hù)作用。其機(jī)制可能與上調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)，下調(diào)Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表