血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)染恢復(fù)放療后組織血管生成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)染恢復(fù)放療后組織血管生成的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王代友申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：溫玉明20030525血管內(nèi)皮生長因子基因轉(zhuǎn)染恢復(fù)放療后組織血管生成的實(shí)驗(yàn)研究全文摘要日的構(gòu)建血管內(nèi)皮生長因子基因的真核表達(dá)質(zhì)粒：應(yīng)用血管內(nèi)皮生長因子基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染的方法恢復(fù)放療后組織血管生成能力。方法采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR)技術(shù)，從人肝癌細(xì)胞株SMMC7721中擴(kuò)增出血管內(nèi)皮生長因子VEGF

2、l65基因片段，用DNA重組技術(shù)將VEGFl65eDNA定向插入pcDNA3真核表達(dá)載體上，構(gòu)建成peDNA3／VEGFt65重組質(zhì)粒，并用酶切電泳分析、PCR擴(kuò)增電泳分析及DNA測序的方法對重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定：應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染方法將重組質(zhì)粒pcDNA3／VEGFl65導(dǎo)入體外培養(yǎng)的大鼠成肌細(xì)胞內(nèi)，采用免疫組化的方法觀察其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)；選40只成年雄性Wistar大鼠右后肢為照射部位進(jìn)行照射，每只大鼠放射總量為30GY，放療完成

3、后，行頸總動脈插管血管造影檢查模型大鼠兩側(cè)后肢血管數(shù)目的變化，取兩側(cè)的后肢肌肉組織標(biāo)本行血管密度、平均截面積、平均管徑及血管超微結(jié)構(gòu)檢查，以確定軟組織血管放療損傷模型是否建立；用肌肉多點(diǎn)注射轉(zhuǎn)染的方法將重組質(zhì)粒pcDNA3／VEGFl65轉(zhuǎn)移至放療損傷模型大鼠右后肢放療損傷區(qū)肌細(xì)胞內(nèi)，而左側(cè)后肢作為治療對照組轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3，每次每只大鼠轉(zhuǎn)染質(zhì)粒200扯g，共治療2次，間隔2周，治療結(jié)束后行VEGFl65mRNA表達(dá)檢測、VEGF