人腎癌干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及其端粒酶活性的研究.pdf

1、目的:通過對(duì)人腎癌細(xì)胞的無血清培養(yǎng)獲取腎癌干細(xì)胞,找出人腎癌干細(xì)胞的成熟的培養(yǎng)方法；進(jìn)一步檢測(cè)腎癌細(xì)胞、腎癌干細(xì)胞中端粒酶的活性,從而探討端粒酶活性在腎癌發(fā)生、發(fā)展及治療方面的重要意義。
　　 方法:利用含有表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、堿性成纖維生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)的DMEM/F12培養(yǎng)基無血清懸浮培養(yǎng)分離腎癌干細(xì)胞,并觀察

2、其生長(zhǎng)
　　 特性；通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)其CD133、CD34的表達(dá)情況及其凋亡率,以正常腎組織細(xì)胞及腎癌細(xì)胞作為對(duì)照,采用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增的方法(Telomeric Repeat Amplification Protocol,TRAP)實(shí)時(shí)定量檢測(cè)腎癌干細(xì)胞端粒酶的活性。
　　 結(jié)果:腎癌干細(xì)胞接種于DMEM/F12無血清培養(yǎng)基后,細(xì)胞呈圓形懸浮于培養(yǎng)液中；2天后有細(xì)胞球生成,每個(gè)細(xì)胞球含3-8個(gè)細(xì)胞,折光性較強(qiáng)；7天后

3、細(xì)胞球明顯增多,體積增大,為規(guī)則的圓形或卵圓形。無血清培養(yǎng)的腎癌干細(xì)胞球CD133+CD34。率明顯高于含血清培養(yǎng)的腎癌細(xì)胞CD133+CD34率,凋亡率較血清培養(yǎng)的。腎癌細(xì)胞低；正常腎組織細(xì)胞未檢測(cè)出有CD133及CD34的表達(dá),三者間比較有顯著意義(F=328.25,P<0.05)。腎癌干細(xì)胞球和腎癌細(xì)胞端粒酶活性均高于正常腎組織細(xì)胞(F=278.74,P<0.05),而前二者之間端粒酶活性無明顯差異。
　　 結(jié)論:與含血清