溶藻弧菌HY9901Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應蛋白的功能研究.pdf

1、弧菌Ⅲ型系統(tǒng)效應蛋白對宿主細胞具有致病功能，研究效應蛋白的結構功能對研究其致病機理和制作疫苗有重要意義。根據(jù)GenBank上面溶藻弧菌的基因序列，設計hopPmaJ、 va1686和type3hy3223對效應蛋白基因的引物，PCR擴增獲得三個基因的全長片段。結果顯示:hopPmaJ全長345bp，共編碼114個氨基酸殘基，生物信息學分析表明其不存在信號肽，有蛋白激酶磷酸化等位點，三級結構預測模型為同源二聚體?？寺『蜏y序分析了va168

2、6和type3hy322基因，va1686全長為1164bp，為溶藻弧菌效應蛋白中的膜通透蛋白基因;type3hy322全長為969bp，為溶藻弧菌效應蛋白中的轉(zhuǎn)運蛋白基因。在大腸桿菌表達type3hy322和va1686，得到Type3hy322和Va1686蛋白。
　　通過對溶藻弧菌HY9901 hopPmaJ基因的PCR擴增、融合，酶切、連接、轉(zhuǎn)化、菌株接合、同源重組和缺失株篩選，成功能構建缺失株△hopPmaJ,并對△ho

3、pPmaJ的生物學表型特征進行了研究，確定突變株具有遺傳穩(wěn)定性。野生株V.alginolyticus HY9901和△hopPmaJ比較，兩者生長速率一致，HopPmaJ生物被膜形成能力，胞外蛋白酶活性沒有顯著變化，△hopPmaJ泳動能力顯著減低?！鱤opPmaJ對斑馬魚的其半致死量LD50為1.2×108cfu/mL，比野生株下降約有兩個數(shù)量級。對△hopPmaJ在魚體中的生物安全性及其免疫保護性進行了研究。用106cfu/mL浸泡