FABP3基因與心肌細(xì)胞分化關(guān)系的研究.pdf

1、第一部分 目的：觀察脂肪酸結(jié)合蛋白(Fat acid binding protein-3，F(xiàn)ABP3)基因在畸胎瘤細(xì)胞P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中表達(dá)水平的變化，探討FABP3基因與心肌細(xì)胞分化之間的關(guān)系。 方法：P19細(xì)胞經(jīng)1％二甲基亞砜(DMSO)誘導(dǎo)懸浮培養(yǎng)4天(d4)形成細(xì)胞聚集體，將聚集體用生長(zhǎng)培養(yǎng)基粘附培養(yǎng)至第15天(d15)，觀察細(xì)胞跳動(dòng)情況；用肌鈣蛋白I(cTnI)抗體行western blot，鑒

2、定心肌細(xì)胞分化；采用RT-PCR、Western Blot技術(shù)，在細(xì)胞分化成熟的不同時(shí)段檢測(cè)P19細(xì)胞中FABP3基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)論：FABP3基因可能參與心肌細(xì)胞的分化。 第二部分:FABP3基因過(guò)表達(dá)對(duì)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的影響 目的：觀察脂肪酸結(jié)合蛋白FABP3基因過(guò)表達(dá)(overexpression)在胚胎癌細(xì)胞P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化過(guò)程中對(duì)細(xì)胞分化的影響，探討FABP3基因與

3、心肌細(xì)胞分化之間的關(guān)系。 方法：構(gòu)建FABP3基因的綠色熒光載體及過(guò)表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染P19細(xì)胞后，以1％二甲基亞砜(DMSO)誘導(dǎo)分化，用熒光顯微鏡和激光共聚焦檢測(cè)FABP3的亞細(xì)胞定位；將FABP3基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染P19細(xì)胞，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及凋亡，并采用RT-PCR技術(shù)在細(xì)胞分化成熟的不同時(shí)段檢測(cè)P19細(xì)胞中心肌分化標(biāo)志基因cTnT、alpha-MHC、GATA4、MEF2c的mRNA表達(dá)水平。