睪酮對Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer'sdisease，AD）是一種神經(jīng)退行性疾病，其病理特征為腦內(nèi)可溶性β-淀粉樣蛋白（β-amyloid，Aβ）的過度沉積形成的老年斑與神經(jīng)元纖維纏結(jié)。AD發(fā)病機(jī)制學(xué)說包括:氧化應(yīng)激、炎癥、膽堿能、鈣穩(wěn)態(tài)失衡、Tau蛋白異常修飾、早老素基因突變、載脂蛋白E基因突變以及Aβ?lián)p傷等學(xué)說。眾多發(fā)病機(jī)制中，Aβ作為AD發(fā)病始動因子的觀點(diǎn)已被廣泛認(rèn)可。
　　 Aβ是Ⅰ型跨膜蛋白淀粉樣蛋白前體蛋白(amylo

2、idprecursorprotein，APP)經(jīng)過β-分泌酶(BACE-1)和γ-分泌酶(γ-secretase)順序剪切的產(chǎn)物，根據(jù)其氨基酸片段的長度大致可分為Aβ25-35、Aβ1-40及Aβ1-42等。Aβ1-42片段最長，毒性最大，在神經(jīng)變性過程中作用最強(qiáng)。
　　 現(xiàn)階段用于AD研究的動物模型主要有各型轉(zhuǎn)基因小鼠，快速老化小鼠（SAM）以及通過海馬CA1區(qū)或者側(cè)腦室注射Aβ誘導(dǎo)的動物模型。轉(zhuǎn)基因鼠雖可模擬人類老年癡呆的神

3、經(jīng)病理特征，但經(jīng)常表現(xiàn)為無或極少的老年斑沉積，細(xì)胞死亡有限及學(xué)習(xí)認(rèn)知功能損害多變。既往大量研究利用可溶性Aβ寡聚體對動物進(jìn)行干預(yù)進(jìn)而誘導(dǎo)制備AD模型，但能否誘導(dǎo)出可靠的AD相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶損害仍存在較大爭議，部分學(xué)者認(rèn)為AD相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶損害是Aβ與其他因素相互作用的結(jié)果。
　　 AD患者不但腦內(nèi)有Aβ的沉積，而且同時(shí)伴有相關(guān)血清性激素水平的降低，血清睪酮水平降低是年齡相關(guān)性男性AD患者的危險(xiǎn)因素。生理水平的雄激素對空間學(xué)習(xí)記憶具

4、有改善作用，然而也有研究顯示睪酮與空間學(xué)習(xí)記憶無關(guān)或呈負(fù)相關(guān)。
　　 雄激素對內(nèi)源性Aβ發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，年齡相關(guān)性的雄激素丟失將增加腦內(nèi)Aβ的水平并相應(yīng)增加AD患病的風(fēng)險(xiǎn)。雄激素調(diào)節(jié)Aβ的機(jī)制還不清楚，但可能涉及三個常規(guī)途徑中的一個或多個，即通過雄激素受體(androgenreceptor，AR)依賴的途徑直接發(fā)揮作用;通過睪酮芳香化為雌二醇，間接通過雌激素發(fā)揮作用;通過對下丘腦-垂體-性腺軸的調(diào)節(jié)間接發(fā)揮作用。
　　

5、 AR在腦內(nèi)主要負(fù)責(zé)學(xué)習(xí)記憶的功能區(qū)高表達(dá)，海馬對空間記憶的獲得發(fā)揮至關(guān)重要的作用。睪酮對空間學(xué)習(xí)記憶的作用可能是通過局部芳香化為雌二醇或者通過與海馬局部AR直接作用實(shí)現(xiàn)的。體內(nèi)雄激素水平與認(rèn)知功能密切相關(guān)，但雄激素究竟通過何種機(jī)制影響認(rèn)知功能目前還無定論。近年，突觸的形態(tài)異常在AD發(fā)病中的作用逐漸受到重視，突觸的異常改變可能是AD發(fā)病機(jī)制中的核心環(huán)節(jié)。
　　 性激素與突觸可塑性(synapticplasticity)的調(diào)節(jié)具有

6、相關(guān)性。雌激素水平的升高可誘導(dǎo)學(xué)習(xí)記憶相關(guān)腦區(qū)產(chǎn)生新的突觸和樹突。雄激素對突觸可塑性調(diào)節(jié)的作用和機(jī)制近些年也開始得到重視。
　　 海馬參與近期空間學(xué)習(xí)記憶的獲取、再現(xiàn)及鞏固，是AD最早受累的病變部位。因此，本研究欲采取雙側(cè)海馬CA1區(qū)可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢模型（復(fù)合模型）大鼠，通過Morris水迷宮檢測能否誘導(dǎo)出可靠的空間學(xué)習(xí)記憶的損害;探討睪酮能否改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的損害;同時(shí)對動物血清睪酮濃度進(jìn)行檢測

7、，探討血清睪酮濃度與空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)之間的關(guān)系;通過給予AR拮抗劑氟他胺驗(yàn)證睪酮是否通過依賴特異性的AR來發(fā)揮作用。此外，通過檢測突觸相關(guān)蛋白SYN與PSD-95表達(dá)量有無變化，并且通過對CaMKⅡ（p-CaMKⅡ）、CREB（p-CREB）及BDNF的檢測探討可能的信號傳導(dǎo)通路。
　　 第一部分，Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害大鼠模型的建立
　　 目的:
　　 觀察雙側(cè)海馬CA1區(qū)可溶性Aβ1

8、-42寡聚體注射聯(lián)合去勢能否誘導(dǎo)出可靠的AD相關(guān)的學(xué)習(xí)記憶功能的損害，并探討Aβ1-42與去勢對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶是否具有協(xié)同作用。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)一:雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為4組（每組10只），分別為正常對照組（gonadally-intactgroup，GIgroup）、假手術(shù)組(shamgonadally-intactgroup，SGIgroup)、溶劑對照組（Vehiclegroup）以及Aβ組(Aβ

9、group)。
　　 實(shí)驗(yàn)二:雄性SD大鼠30只，隨機(jī)分為3組（每組10只），分別為正常對照組(Intactgroup)、去勢假手術(shù)組（Shamgroup）以及去勢組(GDXgroup)。
　　 實(shí)驗(yàn)三:雄性SD大鼠50只，隨機(jī)分為5組（每組10只），分別為對照組(Controlgroup)、Aβ組(Aβgroup)、復(fù)合模型假手術(shù)組(S-Aβ+GDXgroup)、復(fù)合模型組(Aβ+GDXgroup)、去勢組(GDXgr

10、oup)。
　　 雙側(cè)海馬CA1區(qū)埋管:實(shí)驗(yàn)動物經(jīng)2％戊巴比妥鈉（40-60mg/kg）腹腔注射麻醉，固定于腦立體定位儀。暴露前囟(bregma)，參照大鼠腦圖譜，以前囟為始點(diǎn)，向后3.8mm，中線左、右2.5mm處垂直顱骨表面進(jìn)行打孔，垂直顱骨表面進(jìn)針2.9mm（以顱骨外表面為基點(diǎn)），用牙科水泥固定。
　　 可溶性Aβ1-42寡聚體雙側(cè)海馬CA1區(qū)注射:動物于海馬CA1區(qū)埋管1周后進(jìn)行可溶性Aβ1-42寡聚體雙側(cè)海馬C

11、A1區(qū)注射。每側(cè)5min內(nèi)緩慢注入5μLAβ1-42（2μg/μL）。
　　 行為學(xué)測試:術(shù)后第15天至第20天進(jìn)行Moms水迷宮測試。定位航行實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5天，每天訓(xùn)練4次。記錄大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期、上臺前路程及平均游泳速度。第6天進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)，記錄動物120s內(nèi)穿越平臺的次數(shù)及在平臺所在象限停留的時(shí)間百分比等指標(biāo)。
　　 標(biāo)本制備與處理:空間探索實(shí)驗(yàn)測試結(jié)束后24小時(shí)，所有動物深度麻醉，心臟穿刺采血0.5mL

12、，置于抗凝管內(nèi)。靜置30min后進(jìn)行低溫超速離心，4℃，5000rpm，離心20min，取上清分裝于無菌EP管內(nèi)，-80℃存放以備放射免疫法檢測血清睪酮濃度所用。5只大鼠斷頭取腦，冰浴剝離雙側(cè)海馬，-80℃存放以備后用。5只動物取腦組織，常規(guī)組織固定，脫水，透明，石蠟包埋。制備5μM病理切片，進(jìn)行尼氏染色。
　　 結(jié)果:
　　 1、可溶性Aβ1-42寡聚體對SD成年雄性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響
　　 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)

13、果顯示，逃避潛伏期與上臺前路程組間均存在顯著性差異(P＜0.01)。而正常對照組、假手術(shù)組與溶劑對照組三組之間無顯著性差異。Aβ組逃避潛伏期在第4天(P＜0.05)與第5天(P＜0.001)與其他各組存在顯著性差異，較正常對照組明顯增加。Aβ組上臺前路程在第5天(P＜0.05)與其他各組存在顯著性差異，較正常對照組明顯增加。平均游泳速度組間及組內(nèi)均無差異。
　　 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異(P

14、＜0.05)，Aβ組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比較正常對照組明顯減小(P＜0.05)，而正常對照組、假手術(shù)組與溶劑對照之間無差異。穿越平臺次數(shù)各組間也存在顯著性差異(P＜0.05)，Aβ組較正常對照組穿越平臺次數(shù)明顯減小(P＜0.05)，而正常對照組、假手術(shù)組與溶劑對照之間無差異。血清睪酮放射免疫結(jié)果顯示，各組之間無差異。
　　 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，正常對照組、假手術(shù)組及溶劑對照組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量無差異。與正常對

15、照組相比，Aβ組海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量(55.6％)顯著減少(P＜0.001)。
　　 2、去勢對SD成年雄性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響
　　 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組間逃避潛伏期(P＜0.01)與上臺前路程(P＜0.05)組間存在顯著性差異。去勢組在第4天(P＜0.05)與第5天（P＜0.001）逃避潛伏期較正常對照組明顯增加，其他三天組間無差異。去勢組在第4天(P＜0.05)與第5天(P＜0.001)上臺前路程

16、較正常對照組明顯增加，其他三天組間無差異。而平均游泳速度組間及組內(nèi)均無差異。
　　 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異(P＜0.05)。去勢組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比較正常對照組明顯減小(P＜0.05)，而正常對照組與假手術(shù)組之間無差異。各組穿越平臺次數(shù)存在顯著性差異(P＜0.05)，穿越平臺次數(shù)去勢組較正常對照組明顯減小(P＜0.05)，而正常對照組與假手術(shù)組之間無差異。血清睪酮放射免疫結(jié)果顯示，血清

17、睪酮濃度各組之間存在顯著性差異(P＜0.001)，去勢組動物血清睪酮濃度顯著降低，與正常對照組相比存在顯著性差異(P＜0.001)。
　　 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，對照組與假手術(shù)組CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量無差異;與對照組相比，去勢組海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量(47.0％)顯著減少(P＜0.001)。
　　 3、雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢對SD成年雄性大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響
　　 定位航

18、行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逃避潛伏期與上臺前路程各組間均存在顯著性差異（P＜0.001）。Aβ+GDX組逃避潛伏期在第3-5天（第3天(P＜0.05)，第4天(P＜0.001)，第5天(P＜0.001)）與其他各組相比存在顯著性差異。Aβ+GDX組上臺前路程在第4天(P＜0.05)與第5天（P＜0.001）與其他各組相比存在顯著性差異。與同一天Control組相比，逃避潛伏期與上臺前路程明顯增加。動物平均游泳速度組間及組內(nèi)均無差異。
　　

19、 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異(P＜0.05)。與Control組相比，Aβ+GDX組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比明顯減小(P＜0.05)，而Control組與S-Aβ+GDX組之間無差異。穿越平臺次數(shù)各組存在顯著性差異(P＜0.001)，Aβ+GDX組穿越平臺次數(shù)較Control組明顯減小(P＜0.001)，Control組與S-Aβ+GDX組之間無差異。血清睪酮放射免疫結(jié)果顯示，血清睪酮濃度各組之間存在顯

20、著性差異(P＜0.001)。
　　 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，Control組與S-Aβ+GDX組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量無差異。Aβ+GDX組與其他各組相比均存在顯著性差異(P＜0.001)，海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量最少，神經(jīng)元數(shù)量與Control組相比下降82.8％。
　　 結(jié)論:
　　 1、雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力具有損害作用。
　　 2、去勢對大鼠空間學(xué)

21、習(xí)記憶能力具有損害作用。
　　 3、雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的損害作用較單純Aβ1-42寡聚體注射或去勢更嚴(yán)重，二者具有協(xié)同作用，復(fù)合模型動物更適合用于對老年期AD發(fā)病機(jī)制的研究。
　　 第二部分，睪酮對Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害的保護(hù)作用
　　 目的:
　　 探討睪酮能否改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的損害;探討血清睪酮濃度與空間學(xué)習(xí)記憶

22、表現(xiàn)之間的關(guān)系;通過給予AR拮抗劑氟他胺（flutamide）驗(yàn)證睪酮是否通過依賴特異性AR來發(fā)揮作用。
　　 方法:
　　 實(shí)驗(yàn)一:56只復(fù)合模型大鼠隨機(jī)分為7組，每組8只。7組動物給予皮下注射0.75mg睪酮，分別在給藥后0，6，12，24，48，72與96h進(jìn)行心臟穿刺采血測量血清睪酮濃度。
　　 實(shí)驗(yàn)二:56只復(fù)合模型大鼠造模12天后，隨機(jī)分為7組，每組8只。于行為學(xué)測試的前兩天開始給藥，一直到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)

23、結(jié)束，連續(xù)給藥共8天。各組分別皮下注射給予不同劑量的睪酮，即0.25，0.50，0.75，1.00，1.50與2.00mg，0mg組單純給予等劑量的芝麻油。
　　 實(shí)驗(yàn)三:32只復(fù)合模型大鼠造模12天后，隨機(jī)分為4組（每組8只），即復(fù)合模型對照組(C-Aβ+GDXgroup)，睪酮組(T-Aβ+GDXgroup)，氟他胺組(F-Aβ+GDXgroup)，氟他胺+睪酮組(F+T-Aβ+GDXgroup)。睪酮于實(shí)驗(yàn)前2天以及行為學(xué)

24、測試的6天內(nèi)皮下注射。氟他胺于每天行為學(xué)測試前1h通過微量注射器給藥，每側(cè)海馬5μg。
　　 行為學(xué)測試:同第一部分。
　　 標(biāo)本制備與處理:實(shí)驗(yàn)一在各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行血標(biāo)本收集，實(shí)驗(yàn)二、三血液處理同第一部分。實(shí)驗(yàn)二、三每組各4只大鼠斷頭取腦，冰浴剝離雙側(cè)海馬，-80℃存放以備后用。各組剩余動物留取組織標(biāo)本用于組織切片的制備，具體方法同第一部分。
　　 尼氏染色(Nisslstaining)及細(xì)胞計(jì)數(shù):同第一部分。

25、r>　　 結(jié)果:
　　 1、復(fù)合模型大鼠睪酮注射后不同時(shí)間點(diǎn)血清濃度
　　 各時(shí)間點(diǎn)血清睪酮濃度存在顯著性差異(P＜0.001)。其他各給藥組血清睪酮濃度均高于0h組，給藥48小時(shí)后血清睪酮濃度達(dá)到高峰。
　　 2、不同劑量睪酮對復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)的影響
　　 各劑量組動物逃避潛伏期（P＜0.001）與上臺前路程(P＜0.01)均存在顯著性差異。各劑量組逃避潛伏期在第4天(P＜0.01)與第5

26、天(P＜0.001)存在顯著性差異。0.75mg組在第4天(P＜0.01)與第5天(P＜0.001)較0mg組逃避潛伏期明顯縮短。各劑量組上臺前路程在第4天(P＜0.05)和第5天(P＜0.001)存在顯著性差異。0.75mg組較0mg組上臺前路程明顯的減小。平均游泳速度組間及組內(nèi)均無顯著性差異。
　　 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各劑量組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異(P＜0.05)。0.75mg組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比在各劑

27、量組中最大，較0mg組明顯增加(P＜0.05)。穿越平臺次數(shù)各劑量組存在顯著性差異(P＜0.001)，0.75mg組穿越平臺次數(shù)在各劑量組中最大，較0mg組明顯增加(P＜0.001)。血清睪酮濃度各劑量組之間存在顯著性差異(P＜0.001)，與給藥劑量呈劑量依賴性關(guān)系。
　　 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，從0.25mg到1.00mg組完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量隨睪酮給藥劑量的增加而逐漸增多，與0mg組相比均存在顯著性差異(P＜0.001

28、);其中，0.75mg組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量最多，較0mg組升高了162.6％。
　　 3、AR拮抗劑氟他胺對復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶表現(xiàn)的影響
　　 定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逃避潛伏期(P＜0.001)與上臺前路程(P＜0.05)各組間存在顯著性差異，而C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組間無顯著性差異。T-Aβ+GDX組較C-Aβ+GDX組逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.01）。上臺前

29、路程各組間存在顯著性差異(P＜0.05)，T-Aβ+GDX組較C-Aβ+GDX組上臺前路程明顯減?。≒＜0.01）。平均游泳速度組間及組內(nèi)比較均無顯著性差異。
　　 空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，各組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比存在顯著性差異(P＜0.05)。T-Aβ+GDX組在目標(biāo)象限的時(shí)間百分比在所有各組中最大，較C-Aβ+GDX組明顯增加（P＜0.05）。而C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組之間無顯著性差異。

30、穿越平臺次數(shù)各組間存在顯著性差異(P＜0.001)，T-Aβ+GDX組穿越平臺次數(shù)在所有各組中最大，較C-Aβ+GDX組明顯增加(P＜0.001)。C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組之間無顯著性差異。血清睪酮濃度各組之間存在顯著性差異(P＜0.001)，而氟他胺對血清睪酮濃度無影響。
　　 尼氏染色細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，T-Aβ+GDX組大鼠CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元的數(shù)量最多，與其他各組相比差異顯著(P＜0

31、.001)。F-Aβ+GDX組、F+T-Aβ+GDX組與C-Aβ+GDX組海馬CA1區(qū)完整錐體神經(jīng)元數(shù)量無顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1、適量體外補(bǔ)充睪酮可以改善復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的損害。
　　 2、復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶與血清睪酮濃度具有相關(guān)性。
　　 3、氟他胺可以阻斷睪酮對復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的改善作用。
　　 4、睪酮對復(fù)合模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的改善作用部分是通過AR途徑

32、完成的。
　　 第三部分，睪酮對Aβ1-42寡聚體聯(lián)合去勢誘導(dǎo)的空間學(xué)習(xí)記憶損害的保護(hù)作用的機(jī)制研究
　　 目的:
　　 通過對突觸相關(guān)蛋白SYN與PSD-95，以及信號通路中BDNF、CaMKⅡ（p-CaMKⅡ）及CREB(p-CREB)的檢測探討睪酮影響空間學(xué)習(xí)記憶的可能信號機(jī)制，為雄激素改善空間學(xué)習(xí)記憶提供理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 應(yīng)用Westernblot與RT-PCR對SYN

33、、PSD-95、BDNF、CaMKⅡ（p-CaMKⅡ）及CREB(p-CREB)進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果:
　　 1、雙側(cè)海馬可溶性Aβ1-42寡聚體注射聯(lián)合去勢對SYN及PSD-95的影響
　　 Westernblot結(jié)果顯示，Control組與S-Aβ+GDX組內(nèi)SYN與PSD-95表達(dá)量相對較高，兩組間上述指標(biāo)無顯著性差異;與Control組相比，Aβ組、GDX組及Aβ+GDX組SYN與PSD-95表達(dá)量明顯

34、減少，而Aβ+GDX組下降最顯著，組間比較存在顯著性差異(P＜0.001)。
　　 RT-PCR結(jié)果與Westernblot結(jié)果基本一致，β-actinmRNA擴(kuò)增條帶密度各組間無明顯差異，提示各實(shí)驗(yàn)組上樣量相等。Control組與S-Aβ+GDX組內(nèi)SYNmRNA與PSD-95mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物相對較高，條帶密度兩組間無顯著性差異;Aβ組、GDX組及Aβ+GDX組與Control組相比SYNmRNA與PSD-95mRNA的擴(kuò)增

35、產(chǎn)物明顯減少，而Aβ+GDX組下降最顯著，條帶密度組間比較存在顯著性差異(P＜0.001)。
　　 2、睪酮對SYN及PSD-95表達(dá)量的影響
　　 Westernblot結(jié)果顯示，SYN與PSD-95在C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組大鼠海馬組織內(nèi)表達(dá)量較低，組間比較均無顯著性差異;T-Aβ+GDX組與C-Aβ+GDX組比較SYN(P＜0.001)與PSD-95(P＜0.01)表達(dá)量明顯增

36、加。RT-PCR結(jié)果顯示，內(nèi)參β-actinmRNA擴(kuò)增條帶密度各組間無明顯差異，提示各組上樣量相等。SYNmRNA與PSD-95mRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物在C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組間無明顯差異，而T-Aβ+GDX組與C-Aβ+GDX組相比SYNmRNA(P＜0.01)與PSD-95mRNA(P＜0.001)的擴(kuò)增產(chǎn)物顯著增加。
　　 3、睪酮對p-CaMKⅡ/CaMKⅡ表達(dá)量的影響
　　

37、Westernblot結(jié)果顯示，C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組p-CaMKⅡ表達(dá)量較低，組間比較無顯著性差異，T-Aβ+GDX組p-CaMKⅡ表達(dá)量明顯增加，與C-Aβ+GDX組比較有顯著性差異(P＜0.05)，CaMKⅡ表達(dá)量各組間無顯著性差異。
　　 4、睪酮對p-CREB/CREB表達(dá)量的影響
　　 Westernblot結(jié)果顯示，CREB表達(dá)量各組間無差異;C-Aβ+GDX組、F-

38、Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組大鼠海馬組織內(nèi)p-CREB表達(dá)量較低，組間比較無顯著性差異，T-Aβ+GDX組p-CREB表達(dá)量明顯增加，與其他組比較有顯著性差異（P＜0.05）。
　　 5、睪酮對BDNF表達(dá)量的影響
　　 Westernblot結(jié)果顯示，C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組BDNF表達(dá)量較低，組間比較無顯著性差異，T-Aβ+GDX組BDNF表達(dá)量明顯增加，與C-Aβ+G

39、DX組比較有顯著性差異(P＜0.001)。RT-PCR結(jié)果顯示，β-actinmRNA擴(kuò)增條帶密度各組間無明顯差異，提示各實(shí)驗(yàn)組上樣量一致。BDNFmRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物各組間無顯著性差異，C-Aβ+GDX組、F-Aβ+GDX組與F+T-Aβ+GDX組內(nèi)BDNFmRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物較少，條帶密度組間比較無明顯差別，而T-Aβ+GDX組BDNFmRNA的擴(kuò)增產(chǎn)物明顯增加，條帶密度與C-Aβ+＜DX組相比存在顯著性差異（P＜0.01）。