細胞深低溫冷凍損傷機制的實驗研究.pdf

1、研究背景：近年來，深低溫保存技術的應用越來越廣泛。深低溫可以降低細胞的呼吸代謝作用，延緩其功能的喪失，臨床上將生物組織或器官采用特殊方法冷卻至深低溫，并長期保存；待需要時，再將其按特殊方法復溫，以便獲得活的生物體。 2002至2006年，我們先后將2例患者的斷指在冷凍保護劑二甲亞砜(DMSO)的作用下，通過程序降溫在-196℃液氮中保存后再植成功。但術后長期隨訪發(fā)現(xiàn)，患指均有不同程度萎縮。據(jù)冷凍損傷的兩因素假說指出，造成細胞損傷

2、有兩個獨立因素：胞內冰損傷和溶質損傷。一是胞內冰的形成，由過快冷卻所產生的；冷卻速率越快，此損傷越大。另一是“溶液損傷”，由過慢冷卻所產生，使細胞在高濃度溶液中暴露時間過長而遭損傷，冷卻越慢，此損傷越大。但是，目前對低溫損傷兩因素引起細胞的死亡方式沒有進行闡明。 為闡明低溫損傷兩因素引起細胞的死亡方式，我們選取人肝癌細胞株BEL-7402經熒光染色后流式細胞儀檢測細胞凋亡、壞死、和細胞碎片的變化。研究深低溫凍存導致細胞死亡的方式

3、，并觀察對細胞周期的影響。 目的:研究深低溫冷凍損傷導致細胞死亡的機制。 方法:在不同的電解質與冷凍保護劑濃度下：1倍離子濃度下50％甘油、0％、10％、50％DMSO及20倍離子濃度下50％DMSO，對人肝癌株細胞株(BEL-7402)程序降溫至深低溫后復蘇。采用Annexin-V/PI熒光標記雙染色、DNA-Prep stain熒光標記染色流式細胞儀分析凍存前后凋亡、壞死、存活、細胞碎片及BEL-7402細胞周期變化