血管內(nèi)皮生長因子裸質(zhì)粒經(jīng)心內(nèi)膜心肌內(nèi)注射治療豬心肌缺血模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的:1.構(gòu)建VEGF基因與EGFP基因的真核共表達(dá)載體pIRES2-EGFP-hVEGF165,對(duì)離體與在體心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,以確定VEGF基因與EGFP基因的表達(dá)狀況;2.在體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)中,對(duì)NOGA電機(jī)械標(biāo)測系統(tǒng)位置、距離及容量測量的精度進(jìn)行測定,并分析該方法與其他檢測方法的相關(guān)性;3.利用NOGA電機(jī)械標(biāo)測系統(tǒng)區(qū)分正常心肌與梗死心肌;4.評(píng)價(jià)NOGA心內(nèi)膜注射導(dǎo)管pIRES2-EGFP-hVEGF165質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的治

2、療效果及其安全性.研究方法:1.以基因克隆法構(gòu)建pIRES2-EGFP-hVEGF165真核共表達(dá)載體,采用小量酶切法對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行鑒定;以脂質(zhì)體法介導(dǎo)目的基因轉(zhuǎn)染離體心肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞,以經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射法轉(zhuǎn)染在體心肌組織;采用RT-PCR、Western-blotting、熒光顯微鏡及免疫組化染色等方法分別檢測hVEGF165基因與EGFP基因在心肌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá).2.應(yīng)用NOGA電機(jī)械標(biāo)測系統(tǒng)對(duì)體外已知的點(diǎn)、線、容積進(jìn)行

3、重復(fù)測量,利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其可重復(fù)性和準(zhǔn)確性;以NOGA電機(jī)械標(biāo)測系統(tǒng)和左心室造影系統(tǒng)同時(shí)測定某些心功能指標(biāo),以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析其相關(guān)性;通過動(dòng)脈內(nèi)球囊導(dǎo)管以冠狀動(dòng)脈內(nèi)栓塞法建立豬心肌梗死模型,以統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析梗死前、后的NOGA標(biāo)測值.3.通過NOGA電機(jī)械標(biāo)測系統(tǒng)以心內(nèi)膜注射導(dǎo)管進(jìn)行心肌內(nèi)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,觀察質(zhì)粒轉(zhuǎn)染前后血液學(xué)指標(biāo)、超聲心動(dòng)圖以及NOGA標(biāo)測結(jié)果的變化情況;術(shù)后3個(gè)月行冠狀動(dòng)脈造影以了解側(cè)支循環(huán)形成情況;處死動(dòng)物后行組織病