let-7b靶位點SNP調控Bcl-xL表達及對乳腺癌藥物敏感性的影響.pdf

1、目的：探討let-7b靶位點SNP(rs3208684 A＞C)調控Bcl-xL表達及對乳腺癌藥物敏感性的影響及其機制。
　　方法：利用 miRNA靶標預測數(shù)據(jù)庫預測 Bcl-xL3′UTR中目前人類已知miRNA的結合靶點，結合 NCBI dbSNPs數(shù)據(jù)庫篩選出 Bcl-xL基因3′UTR SNP(rs3208684A＞C)為候選SNP。構建野生型Bcl-xL真核表達載體(WT-Bcl-xL)和突變型Bcl-xL真核表達載體(

2、Mut-Bcl-xL)分別轉染乳腺癌MCF-7細胞。Western blot檢測蛋白表達情況。MTT檢測乳腺癌MCF-7細胞的藥物敏感性。雙熒光素酶報告基因檢測let-7b靶向調控Bcl-xL以及SNP(rs3208684 A＞C)對let-7b靶向Bcl-xL3′UTR的影響。
　　結果：let-7b mimics轉染乳腺癌MCF-7細胞后，Western blot結果顯示，與未轉染組和miRNA mimics control組

3、比較，let-7b mimics轉染組的Bcl-xL蛋白表達水平下調，而Bax蛋白表達水平不變；MTT結果顯示在相同濃度的5-FU或ADM組中，let-7b mimics轉染組比未轉染組和miRNA mimics control組對5-FU和ADM的敏感性增加。野生型或突變型 Bcl-xL真核表達載體分別轉染乳腺癌MCF-7細胞，MTT結果顯示Mut-Bcl-xL轉染組比WT-Bcl-xL轉染組對5-FU和ADM的敏感性降低；Weste

4、rn blot結果顯示，與WT-Bcl-xL轉染組相比， Mut-Bcl-xL轉染組的Bcl-xL蛋白表達水平和Bax蛋白表達水平并不改變。將野生型或突變型Bcl-xL真核表達載體分別與let-7b mimics共轉染乳腺癌MCF-7細胞后，Western blot結果顯示，和WT-Bcl-xL與let-7b mimics共轉染組相比， Mut-Bcl-xL與let-7b mimics共轉染組的Bcl-xL蛋白水平上調，Bax蛋白表達水

5、平沒有改變；MTT結果顯示Mut-Bcl-xL與let-7b mimics共轉染組比WT-Bcl-xL與let-7b mimics共轉染組對5-FU和ADM的敏感性降低。雙熒光素酶報告基因實驗結果顯示， psiCHECK2-WT-Bcl-xL3′UTR與let-7b共轉染組比psiCHECK2-WT-Bcl-xL3′UTR與miRNA mimics control共轉染組及空白對照組的熒光素酶活性顯著降低；psiCHECK2-Mut-B

6、cl-xL3′UTR與let-7b共轉染組比psiCHECK2-Mut-Bcl-xL3′UTR與miRNA mimics control共轉染組及空白對照組的熒光素酶活性沒有變化；psiCHECK2-WT-Bcl-xL3′UTR與let-7b共轉染組比psiCHECK2-Mut-Bcl-xL3′UTR與let-7b共轉染組的熒光素酶活性顯著降低。結論：(1)let-7b通過調控Bcl-xL蛋白表達，增加乳腺癌MCF-7細胞對5-FU和A