滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥治療非酒精性脂肪性肝病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　1、觀察滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥對NAFLD大鼠模型的影響，包括大鼠的體重、解剖外觀、肝濕重、肝指數(shù)等。
　　2、測定滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥對NAFLD大鼠模型指標(biāo)性的影響，包括大鼠血清ALT、AST、GGT、GLU、TC、TG等，并利用 ELISA方法測定大鼠血清 IL-6、SOD濃度的變化，對肝臟進(jìn)行組織病理學(xué)觀察，以指標(biāo)化的方式驗(yàn)證滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥對NAFLD的確切療效，以指導(dǎo)臨床。
　　方法：<

2、br>　　雄性SPF級Wistar大鼠60只，體重為188±10g，正常喂養(yǎng)1周以適應(yīng)環(huán)境，1周后，將大鼠按體重層次隨機(jī)分為4組：正常對照組14只，自由飲水和普通飼料飲食；模型對照組18只，中藥高劑量組14只，中藥低劑量組14只，均予自由飲水和高脂飼料飲食（84％基礎(chǔ)飼料，4%蛋黃粉，10%豬油，2%膽固醇），分別用黑色油筆于鼠尾部標(biāo)記編號1-60號，利于隨后觀察對照，每周稱重一次，8周后隨機(jī)處死模型對照組大鼠4只，確定脂肪肝模型成立。

3、
　　造模成功后，分別對低劑量組和高劑量組以1.28g生藥/100 g體重/日和2.56g生藥/100g體重/日行中藥灌胃，模型對照組、正常對照組以生理鹽水灌胃，每天晨起一次灌胃，持續(xù)8周。
　　在灌胃8周后實(shí)驗(yàn)結(jié)束，隔夜禁食，第二天早上先稱體重，后以10%水合氯醛0.33ml/100 g劑量腹腔注射麻醉大鼠，固定大鼠，剖開腹腔，游離筋膜，暴露腹主動(dòng)脈，采用釆血真空管腹主動(dòng)脈取血法（取血約6-10ml），釆血真空管的血樣4℃

4、下靜置2小時(shí)后，3000轉(zhuǎn)/分離心15分鐘，分離血清，分別裝在標(biāo)記號碼的EP管，部分隨即進(jìn)行ALT、AST、GGT、TG、TC、GLU等生化檢測，部分隨即存于-20℃冰箱以備 ELISA測IL-6、SOD值。用無菌鑷子和剪刀將整個(gè)肝臟完整分離出來，電子天平稱取肝濕重，選新鮮肝臟最大葉取小塊肝組織馬上浸泡于10%中性甲醛固定液中固定，用作石蠟切片，以病理組織學(xué)檢測，整個(gè)過程在冰盤上操作。
　　以上化驗(yàn)及檢測結(jié)果，采用SPSS19.0

5、軟件進(jìn)行最后數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料采用平均值（x）±標(biāo)準(zhǔn)差（s）的方式表示。多組間比較采用單因素ANOVA，首先對數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，然后進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊則用 LSD法進(jìn)行兩兩比較，如果數(shù)據(jù)方差不齊，則采用Welch法進(jìn)行方差分析，應(yīng)用DunnettT3法進(jìn)行兩兩比較。等級資料采用秩和檢驗(yàn)。所檢測結(jié)果P＜0.05被認(rèn)為有顯著性差異，P＜0.01被認(rèn)為有非常顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而P＞0.05被認(rèn)為是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：

6、r>　　實(shí)驗(yàn)1、滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥對NAFLD大鼠肝功、血脂、血糖及血清 IL-6、SOD影響的實(shí)驗(yàn)研究
　　1、大鼠血清ALT、AS T比較，高劑量組、低劑量組與模型對照組比較有非常顯著性差異（P＜0.01，P＜0.01），高劑量組與低劑量組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。血清GGT比較，高劑量組與模型對照組比較，P＜0.05，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異，而低劑量組與模型對照組比較，P＞0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、大鼠

7、血清TC、TG比較，高劑量組與模型對照組比較均有非常顯著性差異（P＜0.01，P＜0.01），低劑量組與模型對照組比較均有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.05），高劑量組與低劑量組比較均有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.05）。
　　3、大鼠空腹血糖比較，高劑量組與模型對照組比較有非常顯著性差異（P＜0.01），低劑量組與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），而高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異（P＜0.05）。

8、　　4、大鼠血清IL-6濃度比較，高劑量組、低劑量組與模型對照組比較均有非常顯著性差異（P＜0.01，P＜0.01），高劑量組與低劑量組比較有顯著性差異（P＜0.05）。
　　5、大鼠血清SOD比較，高劑量組與模型對照組比較有非常顯著性差異（P＜0.01），低劑量組與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），高劑量組與低劑量組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　實(shí)驗(yàn)2、滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法對NAFLD大鼠肝組織病理學(xué)影響

9、的實(shí)驗(yàn)研究
　　1、剖開大鼠腹腔，肉眼所見，模型對照組大鼠腹腔肥大，脂肪組織豐富，肝臟體積增大明顯，色澤呈黃色或泛白色，肝臟包膜緊張，切面油膩，呈典型脂肪肝外觀。高劑量組、低劑量組較模型對照組腹腔脂肪組織有不同程度減少，肝臟體積減小，色澤呈暗紅色或偏黃色，一部分大鼠肝臟切面有油膩感，高劑量組肝臟外觀較正常對照組比較接近。
　　2、滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥高劑量組、低劑量組大鼠肝濕重均明顯低于模型對照組（P＜0.01，P＜0.0

10、1），差異有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高、低劑量組肝濕重比較P＞0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。復(fù)方中藥高劑量組、低劑量組大鼠肝指數(shù)均明顯低于模型對照組（P＜0.01，P＜0.01），差異有非常顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，高、低劑量組肝指數(shù)比較P＞0.05，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、各組肝組織病理學(xué)所見，模型對照組：肝組織結(jié)構(gòu)不清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)尚存。肝細(xì)胞彌漫水變性，部分氣球樣變。肝實(shí)質(zhì)內(nèi)可見肝細(xì)胞多灶狀壞死，重度彌漫性脂肪變性（占肝細(xì)胞50-75%），

11、并見肝細(xì)胞再生及增生。部分肝界板破壞，可見碎屑樣壞死。匯管區(qū)擴(kuò)大，纖維組織增生，長入肝小葉內(nèi)，并見纖維間隔形成，伴中等慢性炎細(xì)胞浸潤。高劑量組：肝組織結(jié)構(gòu)尚清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)存在。肝細(xì)胞輕—中度水變性。肝實(shí)質(zhì)內(nèi)偶見肝細(xì)胞點(diǎn)灶狀壞死，肝細(xì)胞散在輕—中度脂肪變性（占肝細(xì)胞5-30%），并見肝細(xì)胞再生。局灶性肝界板可見輕度碎屑樣壞死。部分匯管區(qū)輕度擴(kuò)大，纖維組織輕度增生，偶見少量慢性炎細(xì)胞浸潤。低劑量組：肝組織結(jié)構(gòu)欠清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)尚存。肝細(xì)胞

12、中度水變性，小灶性氣球樣變性。肝實(shí)質(zhì)內(nèi)可見肝細(xì)胞點(diǎn)灶狀壞死，肝細(xì)胞中度脂肪變性（占肝細(xì)胞30-50%），并見肝細(xì)胞再生及增生。局灶性肝界板可見碎屑樣壞死。匯管區(qū)擴(kuò)大，纖維組織增生，長入肝小葉內(nèi)，部分伴少量慢性炎細(xì)胞浸潤。正常對照組：肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞及肝血竇沿中央靜脈呈放射狀整齊排列。肝細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞大小一致，核圓形，位于細(xì)胞中央，染色質(zhì)較稀疏，核膜清楚，偶見肝細(xì)胞增生。匯管區(qū)無擴(kuò)大，未見纖維組織增生及炎細(xì)

13、胞浸潤。
　　結(jié)論：
　　1、滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥能顯著降低NAFLD大鼠血清ALT、AST、GGT，改善肝功能，療效確切，但療效沒有表現(xiàn)出劑量相關(guān)性。
　　2、滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥可以明顯降低血TC、TG，糾正血脂紊亂，減少肝細(xì)胞脂肪沉積，同時(shí)可以顯著降低空腹血糖，且以上作用表現(xiàn)出劑量相關(guān)性趨勢。
　　3、利用ELISA測定濃度，滌痰散結(jié)活血軟堅(jiān)法中藥可以顯著減低血清IL-6濃度，減輕炎性反應(yīng)，減少其誘導(dǎo)的