秦艽細胞懸浮培養(yǎng)研究.pdf

1、龍膽苦苷(Gentiopicroside)為裂環(huán)環(huán)烯萜苷類化合物,具有保肝利膽、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、抗病毒、抗氧化、健胃、抗?jié)兊人幚碜饔?。用龍膽苦苷研究開發(fā)新藥具有良好的應用前景,但隨著龍膽苦苷的開發(fā)利用,其來源問題突現(xiàn)。本論文選用秦艽為研究材料,嘗試采用植物細胞懸浮培養(yǎng)的方法生產(chǎn)龍膽苦苷,以期解決龍膽苦苷的來源問題。
　　 本論文以龍膽苦苷積累量為指標,以高效液相色譜法為分析手段,研究了高產(chǎn)細胞系的篩選、培養(yǎng)條件的優(yōu)化;研究了

2、細胞生長、龍膽苦苷積累及主要營養(yǎng)成分的消耗關系與規(guī)律。研究結果如下:
　　 1.采用紫外誘變--小細胞團法篩選得到高產(chǎn)龍膽苦苷的細胞系UV-4-b,該細胞系龍膽苦苷含量為0.242mg/g,比篩選前提高了64.63％。
　　 2.本論文細胞種齡、裝液量影響的試驗結果,結合前期課題組研究,得到最佳懸浮培養(yǎng)條件為:MS為基本培養(yǎng)基、初始pH7.0、30g/L蔗糖為碳源、接種細胞種齡為15d,裝液量為40％～50％,25℃、1

3、10r/min下暗培養(yǎng)。
　　 3.誘導子對秦艽懸浮細胞影響結果表明:100mg/L黑曲霉誘導子及20mg/L蜜環(huán)菌誘導子,使龍膽苦苷含量比對照組分別提高了12.3％、13.7％,產(chǎn)量分別提高了23.99％、9.06％。米曲霉誘導子及酵母菌誘導子對秦艽細胞生長及龍膽苦苷的積累都有明顯的抑制作用。
　　 4.秦艽懸浮細胞的生長受初始蔗糖、氮、磷濃度的影響。不同蔗糖濃度影響細胞的指數(shù)生長期持續(xù)時間,從而影響最大生物量;不同氮

4、濃度影響細胞延滯期持續(xù)時間;不同磷濃度影響細胞生長形態(tài),高磷濃度(2.5mmol/L及5mm01/L)對于細胞生長不利。適合細胞生長的蔗糖濃度為:30～50g/L,氮濃度為60mmol/L,磷濃度為0.625～1.25mmol/L。
　　 5.秦艽懸浮細胞中龍膽苦苷含量呈現(xiàn)兩階段積累的情況。龍膽苦苷積累與細胞生長有關,符合延滯期越短,龍膽苦苷開始積累越快的規(guī)律,且最高龍膽苦苷含量,符合細胞生物量越高,龍膽苦苷含量越低的規(guī)律。