維生素D受體基因BsmI位點多態(tài)性與發(fā)育性髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良的相關(guān)性.pdf

1、目的： 發(fā)育性髖關(guān)節(jié)發(fā)育不良(Developmental dysplasia of the hip，DDH)是小兒骨科常見的肢體畸形，其發(fā)病率因地區(qū)與種族不同有很大差異，一般白種人發(fā)病率高，黑種人低，而黃種人介于兩者之間。目前，DDH病因不清，認為是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。DDH的發(fā)生有一定的家族聚集性及遺傳傾向，但又不符合孟德爾遺傳模式，因此，是一種復(fù)雜的多基因病。 目前認為DDH是多個微效基因和主效基因功能

2、的疊加與環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，其中，遺傳因素發(fā)揮主要作用。前期，我們課題組在國家自然科學基金的資助下，對一個四代的DDH家系進行全基因組掃描，結(jié)果支持SNP位點rs2254210與DDH連鎖。rs2254210位點位于VDR基因的第2內(nèi)含子，因此，提示維生素D受體基因(Vitamin D receptor gene，VDR)可能是DDH的易感基因。此前，已有VDR與DDH相關(guān)性的研究，但VDR基因是否是DDH的主要易感基因尚存在爭議。

3、由于DDH不同病理形態(tài)及種族人群的差異，尚不能完全排除VDR基因在我國漢族人群中作為DDH候選基因的可能性。 基于以上原因，在本研究中我們采用PCR-測序的方法，對VDR基因BsmI多態(tài)位點進行基因分型，擬通過病例-對照研究證實VDR基因是否與我國北方漢族人群DDH的發(fā)生相關(guān)，為進一步從分子水平揭示DDH的發(fā)病機制奠定基礎(chǔ)。 材料與方法： 1、標本來源 54個DDH患兒及55個正常兒的外周靜脈血均來自中國

4、醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院小兒骨科。所有DDH患兒均經(jīng)臨床及影像學確診，不包括畸形性髖脫位、神經(jīng)源性髖脫位及綜合征性髖脫位。正常對照組均為意外傷致骨折的兒童，有任何遺傳性疾病史者被排除在外。留取患兒及正常兒童外周靜脈血各5ml，枸椽酸鈉抗凝后-80℃深低溫冰箱凍存?zhèn)溆谩?2、基因型分析 應(yīng)用試劑盒提取外周血DNA。PCR擴增SNP位點后測序，鑒定基因型。 3、統(tǒng)計學分析 根據(jù)測序結(jié)果，直接讀取每個樣本VDR基因

5、BsmI位點的基因型，并計算每個等位基因頻率及基因型頻率，采用精確概率的X2檢驗，比較病例組及對照組中等位基因及基因型頻率分布的差異。同時，采用X2檢驗，把正常對照組與文獻報道的不同人群中該位點的等位基因或基因型頻率數(shù)據(jù)相比較，以了解VDR基因BsmI位點的多態(tài)性在不同種族人群中的差異。 結(jié)果： VDR基因BsmI位點測序結(jié)果顯示，在54例DDH患兒中檢測到了AA、AG及GG共3種基因型；在55例對照組只檢測到了AG和

6、GG基因型，未檢測到AA基因型。DDH組與對照組的基因型分布無明顯的統(tǒng)計學差異(X2=1.278，P=0.527)；DDH組與對照組的等位基因頻率分布也無明顯的統(tǒng)計學差異(X2=0.629，P=0.428)。 本組正常兒的VDR基因BsmI位點的基因型分布與美國人、澳洲人及法國人均存在明顯的統(tǒng)計學差異(P<0.01)，而且與中國南方漢族人的基因型分布也存在差異(P<0.05)，但與已報道的中國北方漢族人無明顯不同(P>0.05)