血小板活化因子受體拮抗劑PMS-1077誘導(dǎo)人類(lèi)急性早幼粒白血病細(xì)胞HL-60分化和人類(lèi)B淋巴瘤細(xì)胞Raji凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討一種血小板活化因子受體拮抗劑，英文名：2-N,N-Diethylaminocarbonyloxymethyl-1-diphenylmethyl-4-(3，4，5-trimethoxyb enzoyl)piperazine，hydrochloride，簡(jiǎn)稱(chēng)(PMS-1077)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化和Raji細(xì)胞凋亡的機(jī)制。已知該化合物的抗血小板和抗HIV活性，抗腫瘤活性尚未見(jiàn)報(bào)道。 方法：用不同濃度PMS-1077處理急

2、性早幼粒白血病細(xì)胞HL-60和B淋巴瘤細(xì)胞Raji細(xì)胞24、48、72h后，經(jīng)MTT和臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)PMS-1077對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用；克隆形成率實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)藥物處理后兩種細(xì)胞形成克隆的能力；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)PMS-1077對(duì)兩種細(xì)胞的細(xì)胞周期的影響，后面的實(shí)驗(yàn)分成兩部分，其一，用PMS-1077處理HL-60細(xì)胞48h后，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)HL-60細(xì)胞表面分化抗原表達(dá)的改變；聚苯乙烯乳膠顆粒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HL-60細(xì)胞吞噬能力的變化，其

3、二，AO/EB染色實(shí)驗(yàn)和Annexin V/PI雙染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)經(jīng)藥物處理48h后Raji細(xì)胞的凋亡狀況。 結(jié)果：不同濃度PMS-1077處理細(xì)胞24，48，72h后，MTT和臺(tái)盼藍(lán)染色的實(shí)驗(yàn)表明該化合物對(duì)兩種細(xì)胞的增殖都有很強(qiáng)的抑制作用，且有濃度和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，最高抑制率可達(dá)100％；克隆形成率實(shí)驗(yàn)證明該藥物能抑制兩種細(xì)胞在軟瓊脂上形成克隆的能力，在80μM以上，克隆抑制率達(dá)到100％；經(jīng)PMS-1077處理24h和48h后，流式

4、細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示該化合物能使兩種細(xì)胞阻滯在G0/G1期，且HL-60細(xì)胞沒(méi)有凋亡峰出現(xiàn)，Raji細(xì)胞在100μM時(shí)有13.9％的凋亡峰出現(xiàn)，且呈濃度依賴(lài)關(guān)系，提示該化合物誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化，誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡；PMS-1077處理HL-60細(xì)胞48h后流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)HL-60細(xì)胞表面分化抗原CD11b，CD14，CD15，CD13，CD34，HLA-DR，結(jié)果顯示CD11b，CDl4，CD34顯著增加，CD15，CD13，H

5、LA-DR無(wú)顯著變化，表明HL-60向單核/巨噬細(xì)胞方向分化；聚苯乙烯乳膠顆粒吞噬實(shí)驗(yàn)證明HL-60細(xì)胞出現(xiàn)了吞噬功能，在40μM時(shí)，吞噬率為52％，且細(xì)胞形態(tài)變得不規(guī)則，細(xì)胞表面出現(xiàn)了突起和馬蹄形細(xì)胞核，提示該細(xì)胞可能分化為吞噬細(xì)胞；Raji細(xì)胞經(jīng)PMS-1077處理48h后，AO/EB染色實(shí)驗(yàn)和Annexin V/PI雙染實(shí)驗(yàn)證明Raji細(xì)胞經(jīng)PMS-1077處理48h后，細(xì)胞是通過(guò)凋亡而不是壞死途徑抑制細(xì)胞增殖，且凋亡呈濃度依賴(lài)關(guān)