同種異體神經(jīng)橋接復(fù)合體修復(fù)兔坐骨神經(jīng)缺損免疫排斥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)將體外分離、培養(yǎng)、提純的胎兔雪旺細(xì)胞種植到經(jīng)化學(xué)處理的脫細(xì)胞異體神經(jīng)段中制成神經(jīng)橋接復(fù)合體。然后將橋接復(fù)合體移植到成年兔缺損的坐骨神經(jīng)，觀察有無(wú)免疫排斥反應(yīng)，從而證實(shí)神經(jīng)橋接復(fù)合體的抗原性小或無(wú)，為臨床應(yīng)用同種異體神經(jīng)修復(fù)周圍神經(jīng)損傷提供理論基礎(chǔ)。 方法：1.種植雪旺細(xì)胞的去細(xì)胞神經(jīng)移植物的構(gòu)建：1.1雪旺細(xì)胞培養(yǎng)：取懷孕28天的新西蘭白兔，耳緣靜脈注射空氣處死后迅速取胎兔。在手術(shù)顯微鏡下無(wú)菌條件下取胎兔的雙側(cè)坐骨神

2、經(jīng)，盡量剝除神經(jīng)外膜及束膜，應(yīng)用雙酶(trypsin/collagenase)反復(fù)消化法與差速貼壁法分離純化和培養(yǎng)雪旺細(xì)胞。1.2 去細(xì)胞神經(jīng)橋接體制備：取成年健康新西蘭白兔一只，分別自梨狀肌下緣水平以遠(yuǎn)切取雙側(cè)坐骨神經(jīng)，作為異體神經(jīng)的來(lái)源。用TritoX-100進(jìn)行神經(jīng)萃取。1.3 取雪旺細(xì)胞與去細(xì)胞同種異體神經(jīng)體外共同培養(yǎng)：制備去細(xì)胞同種異體神經(jīng)移植物，顯微注射法將體外培養(yǎng)的雪旺細(xì)胞與去細(xì)胞神經(jīng)移植物共培養(yǎng)。2.術(shù)前抽取10只成年健

3、康的新西蘭兔靜脈血進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。3.種植雪旺細(xì)胞的去細(xì)胞神經(jīng)移植物橋接兔坐骨神經(jīng)缺損：取前述10只成年兔用速眠欣(0.1ml/kg)耳緣靜脈麻醉后，消毒，在左側(cè)臀部至大腿的弧形切口，顯露出坐骨神經(jīng)后，造成坐骨神經(jīng)20mm的缺損。 取上述制備的復(fù)合體用8/0無(wú)損傷線端端吻合，縫合臀大肌及皮膚。4.術(shù)后觀察兔的精神狀態(tài)，飲食活動(dòng)，傷口愈合情況。5.組織形態(tài)學(xué)觀察：觀察術(shù)后5日、12日局部炎性浸潤(rùn)情況。6.術(shù)后5日及12日進(jìn)

4、行兔靜脈血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)。7統(tǒng)計(jì)分析：采用t檢驗(yàn)。 結(jié)果：兔術(shù)后精神狀態(tài)佳，飲食良好，有跛行，傷口無(wú)感染。術(shù)后5日與12日取標(biāo)本HE染色觀察有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)細(xì)胞變性壞死，無(wú)神經(jīng)結(jié)構(gòu)破壞及神經(jīng)基底膜管塌陷，無(wú)移植神經(jīng)中心性壞死、纖維瘢痕化。移植前及移植后5日與12日外周血中CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞比例無(wú)變化(P>0.05,P>0.05)，同時(shí)CD4<'+>/CD8<'+>值也無(wú)升高(P>0.05)。