Fas配體胞外區(qū)的克隆、表達(dá)及Fas反義肽的篩選和活性研究.pdf

1、Fas(APO-1,CD95)屬于腫瘤壞死因子超家族之一員,是Fas配體(FasL)的受體.當(dāng)它的配體FasL與之結(jié)合后,可以引起表達(dá)Fas的細(xì)胞發(fā)生凋亡.該研究依據(jù)AHBs理論,應(yīng)用自行編寫的軟件,在FasL分子中尋找到與Fas相應(yīng)的反義多肽最為接近的十肽結(jié)構(gòu)即FasL<,256-265>(匹配度為70﹪).化學(xué)合成了十肽結(jié)構(gòu),與重組FasL-ECD(FasL胞外區(qū))平行對照,研究了其對培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的相互作用.該研究為依據(jù)ABHs理

2、論,篩選與開發(fā)具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的抗腫瘤多肽類藥物具有一定的指導(dǎo)意義.(1)分析人黑色素瘤細(xì)胞(A375)中FasL基因的表達(dá),克隆人FasL胞外區(qū)的編碼基因,并在大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá).純化重組蛋白FasL-ECD,并分析其生物學(xué)活性,篩選出對之最敏感的腫瘤細(xì)胞株;(2)根據(jù)生物信息學(xué)軟件分析結(jié)果,選取FasL胞外區(qū)256-265的十肽(N)-HLYVNVSELS-(C)作為目標(biāo)分子,委托生物公司合成該十肽;(3)分析FasL-EC