先天性巨結(jié)腸患兒結(jié)腸壁組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1表達的研究.pdf

1、背景和目的
　　 先天性巨結(jié)腸癥又稱為赫希施普龍病(Hirschsprung's disease,HD)是一種比較常見的小兒消化道發(fā)育畸形,屬于一種先天性疾病。發(fā)病率約為1/5000,存在一定的性別差異,男女比例約為4:1。HD是造成結(jié)腸腸管增粗的原因之一,可發(fā)生在近端結(jié)腸,主要位于乙狀結(jié)腸和部分降結(jié)腸;也可發(fā)生在直腸和遠端乙狀結(jié)腸;HD患兒結(jié)腸狹窄段和擴張段兩部分結(jié)腸組織之間有一過渡或移形區(qū),往往呈漏斗形,長約3cm-8cm不

2、等。已有實驗證實了轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白在整個腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中存在。近年來NKX2-1的研究主要集中在甲狀腺、腦及肺組織等有關(guān)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育疾病過程的研究中,在腸神經(jīng)系統(tǒng)的研究比較少。先天性巨結(jié)腸患兒的腸蠕動功能可能與轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白在HD患兒腸管管壁中的表達存在一定的相關(guān)性,本次實驗的目的是應(yīng)用免疫組化SP法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)定性和定量測定轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸壁中的表達,以便更

3、加深入的了解HD在分子基礎(chǔ)上的確切發(fā)病機制,為HD疾病的臨床診斷提供可靠的參考。
　　 材料和方法
　　 1應(yīng)用免疫組化SP法觀察30例HD手術(shù)切除標本(分別取HD患兒狹窄段、移行段、擴張段結(jié)腸壁全層組織)同時取30例腸套疊患兒手術(shù)切除并具備神經(jīng)節(jié)細胞的全層結(jié)腸組織做為對照組,觀察各組織標本中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸壁中的表達情況;
　　 2應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法檢測30例新鮮的HD手術(shù)切除標本

4、(包括HD患兒狹窄段、移行段、擴張段全層結(jié)腸組織)和30例腸套疊患兒手術(shù)切除的存在神經(jīng)節(jié)細胞的全層結(jié)腸組織做對照組,觀察轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸組織中的表達情況:
　　 3統(tǒng)計學(xué)處理:數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0軟件處理,HD患兒各組結(jié)腸組織和正常對照組結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白表達的比較采用兩個獨立樣本的秩和檢驗;HD患兒各組結(jié)腸組織和正常對照組結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1mRNA表達的比較采用兩個獨立

5、樣本的t檢驗或校正t檢驗。檢驗水準a=0.05。
　　 結(jié)果
　　 1轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1在巨結(jié)腸患兒窄段結(jié)腸組織中表達明顯減少,在擴張段結(jié)腸組織中表達正常,在移行段中的表達處于二者之間。
　　 2 HD患兒狹窄、移行段結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白和mRNA表達與正常對照組結(jié)腸組織中轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因蛋白的mRNA表達進行比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=5.236和2.926,P＜0.008;t'=1

6、9.475和14.429,P＜0.05),HD患兒擴張段結(jié)腸組織和對照正常結(jié)腸組織中NKX2-1蛋白和mRNA的表達比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(Z=2.336,P=0.019＞0.008;t=0.985,P=0.329＞0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1 HD患兒狹窄段結(jié)腸壁組織中缺少轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因的表達可能是HD發(fā)病的基本病理改變之一。
　　 2轉(zhuǎn)錄因子NKX2-1基因在HD患兒結(jié)腸組織中表達減少可能是導(dǎo)