腰痛舒膠囊對骨關(guān)節(jié)炎軟骨保護(hù)機(jī)理的研究.pdf

1、骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA)又稱退行性關(guān)節(jié)炎,是關(guān)節(jié)軟骨發(fā)生變性,繼之鄰近軟骨增生、骨化而形成的關(guān)節(jié)病變,是最常見的老年病.已有的研究重在軟骨基質(zhì),隨著對其機(jī)制研究的深入,逐步認(rèn)識到軟骨細(xì)胞損傷,特別是軟骨細(xì)胞凋亡與增殖平衡紊亂是其主要機(jī)制,因此,對骨關(guān)節(jié)炎的研究應(yīng)從軟骨細(xì)胞著手.該研究即探討腰痛舒膠囊骨關(guān)節(jié)炎軟骨保護(hù)作用及其機(jī)理.研究目的1理論研究:探討骨關(guān)節(jié)炎的病機(jī)特點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)研究:腰痛舒膠囊對骨關(guān)節(jié)炎軟骨的保護(hù)作用

2、以及從軟骨細(xì)胞凋亡與增殖的角度探討機(jī)制.研究方法1分析骨關(guān)節(jié)炎的證候特征,結(jié)合歷代醫(yī)家對關(guān)節(jié)痛的認(rèn)識,提出骨關(guān)節(jié)炎的病機(jī)特點(diǎn).2按Hulth法造模2月與5月,造成大鼠膝骨關(guān)節(jié)炎早期與中期模型,分別用高、中、低劑量的腰痛舒膠囊灌胃治療2月,取材,進(jìn)行肉眼大體觀察與X線攝片后,分別取脛骨平臺內(nèi)側(cè)、股骨髁處軟骨,利用光鏡、掃描電鏡、透射電鏡、流式細(xì)胞儀、免疫組化,對軟骨組織積分、凋亡率、軟骨表面超微結(jié)構(gòu)、以及Ⅱ型膠原的分布進(jìn)行觀察,并通過對軟

3、骨表達(dá)的P5 3、Bcl-2、PCNA、TGF-β1以及血清NO、IL-1、TNF-α檢測,探討其作用機(jī)理.3通過建立軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,探討腰痛舒膠囊對軟骨細(xì)胞凋亡/增殖及其合成代謝功能的影響.3.1利用硝普鈉(SNP)、TNF-α誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞凋亡,觀察腰痛舒含藥血清對軟骨細(xì)胞凋亡的影響,采用Annexin v/PI雙參數(shù)法及透射電鏡對軟骨細(xì)胞凋亡進(jìn)行定量、定性檢測.3.2用MTT法觀察腰痛舒膠囊對正常培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞增殖的影響3.3

4、采用同位素標(biāo)記<'3>H-TdR、<'3>H-Pro、<'35>S-Na<,2>SO<,4>摻入法測定軟骨細(xì)胞DNA含量、以及合成膠原、蛋白多糖的功能,觀察腰痛舒膠囊對凋亡狀態(tài)下軟骨細(xì)胞合成代謝功能的情況.研究結(jié)論:腎虛絡(luò)阻是骨關(guān)節(jié)炎的主要病機(jī)特點(diǎn),以補(bǔ)腎通絡(luò)法組方的腰痛舒對兔膝骨關(guān)節(jié)炎有一定保護(hù)作用,能抑制軟骨的破壞,促進(jìn)軟骨的修復(fù).其機(jī)制與增強(qiáng)軟骨bcl-2、抑制p53的表達(dá),從而抑制了因IL-1α、TNF-α、NO升高誘導(dǎo)的軟骨細(xì)