四川綿陽地區(qū)豬藍耳病檢測及其分子流行病學分析.pdf

1、豬繁殖呼吸綜合征PRRS(Porcine reproductive and respiratory syndrome，又稱豬藍耳病)是由PRRSV感染造成的，目前在世界范圍內(nèi)廣泛流傳，主要導致母豬的繁殖能力差，抵抗能力弱，繼發(fā)疾病率和高死亡率較高，是現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)重點預防的疾病，以避免給養(yǎng)豬業(yè)帶來的災難性損失，同時維護畜產(chǎn)品安全和環(huán)境衛(wèi)生。為及時、有效地了解地域性PRRS病的感染和流行情況，ELISA檢測抗體的方法和RT-PCR檢測抗原的方

2、法在生產(chǎn)實踐和實驗室得到了最經(jīng)常的使用，以及從分子生物學層面分析高致病性PRRSV的遺傳變異情況，為下一步科學的防控該病提供理論依據(jù)。
　　本論文通過ELISA方法檢測2013、2014年綿陽9個地區(qū)1404份血清進行了豬藍耳病ELSA抗體檢測，免疫PRRSV疫苗后血清的抗體平均陽性率為80.8％（達到了農(nóng)業(yè)部的基本要求70％以上），未免疫豬藍耳疫苗的血清抗體陽性率為14.3％。從不同采樣群體來看，規(guī)模養(yǎng)殖場(91.8％)＞散養(yǎng)戶

3、(81.7％)＞屠宰場(70.5％);2014年的抗體平均合格率較2013年平均合格率有所下降。還通過RT-PCR方法檢測本實驗中被檢測的綿陽地區(qū)部分疑似發(fā)病豬場共采集病料78份，檢測結(jié)果平均陽性率從大到小為高致病性PRRSV(35.90％)＞經(jīng)典PRRSV(17.95％)＞HP-PRRSV+PRRSV(11.65％);而該地區(qū)被檢測的部分屠宰樣品282份中，經(jīng)典PRRSV的陽性率為2.84％，高致病性PRRSV陽性率為11.70％，無

4、HP-PRRSV+PRRSV混合感染。HP-PRRSV依然是該地區(qū)豬藍耳病感染率最高的毒株類型。經(jīng)過抗原檢測后的病料中篩選出69個毒株，然后對目的基因Nsp2、ORF5進行RT-PCR擴增、純化、測序分析。49個Nsp2基因序列的核苷酸之間的同源性為90.2％～100％，推導氨基酸的同源性為73.7％～100％;與LV核苷酸同源性為49.7％～50.0％，推導氨基酸的同源性為31.1％～37.2％;與VR-2332、MLV核苷酸同源性為

5、79.2％～82.6％，推導氨基酸的同源性為60.8％～75.0％;與國內(nèi)2006年以前BJ-4、HB-1(sh)、HN1毒核苷酸的同源性為79.0％～95.1％，推導氨基酸的同源性為70.9％～92.6％;與國內(nèi)2006年及以后分離的毒株JXA1、SY0608等核苷酸同源性為93.1％～98.6％，推導氨基酸的同源性為83.0％～98.5％。同時獲得的20個ORF5之間核苷酸同源性為91.9％～100％，推導其氨基酸的同源性為88.0

6、％～100％;與LV同源性為62.6％～65.8％，推導其氨基酸的同源性為56.6％～59.2％;與VR-2332同源性為88.2％～90.2％，推導其氨基酸的同源性為86.5％～89.0％;與2006年以前毒株HN1同源性為87.1％～90.2％，氨基酸的同源性為84.5％～90.0％;與2006年及以后毒株JXA1、SXHZ01同源性為95.2％～99.2％，氨基酸的同源性為89.0％～99.0％。預測GP5的N-糖基化位點以4～5