LIN-10與HIF-1介導的缺氧神經(jīng)損傷的相關(guān)性初步研究.pdf

1、實驗目的：通過細胞遺傳學的方法,觀察VAMP,LIN-10,RAB-3,SNG-1在缺氧條件下的表達變化,從而明確缺氧引起神經(jīng)損傷的作用部位并篩選出缺氧相關(guān)因子;觀察篩取出的缺氧相關(guān)因子LIN-10與經(jīng)典缺氧因子HIF-1之間是否存在相關(guān)性,為后續(xù)深入研究缺氧導致神經(jīng)損傷的具體分子機制奠定基礎(chǔ)。
　　設(shè)計時間及地點細胞生物學試驗,于2011年9月—2012年2月于美國斯坦福大學生命科學系ShenLab完成。
　　材料：本實驗

2、中所有涉及的突變實驗動物,實驗試劑,實驗儀器等均來自美國斯坦福大學ShenLab。
　　方法：本實驗可基本分為兩個部分,第一部分為缺氧相關(guān)因子的篩選,即將含有候選因子的轉(zhuǎn)基因?qū)嶒瀯游锓謩e置于低氧及常氧環(huán)境下培育后,在共聚焦顯微鏡下觀察其在神經(jīng)元的表達情況,從而篩選出目的因子。第二部分為已篩選出的目的因子LIN-10與HIF-1的相關(guān)性研究,將已篩選出的缺氧相關(guān)因子LIN-10通過顯微注射的方法轉(zhuǎn)基因至含有hif-1突變的相關(guān)實驗動

3、物體內(nèi),在共聚焦熒光顯微鏡下觀察其在神經(jīng)元的表達情況。
　　結(jié)果：在缺氧相關(guān)基因篩選實驗中,實驗組缺氧條件下培養(yǎng)的kyIs235(-)在尾部兩側(cè)神經(jīng)元內(nèi)的LIN-10熒光標記基本消失,而與其相應的對照組常氧條件下kyIs235(+)在相同部位熒光標記亮度顯著;其余候選因子的實驗組與對照組內(nèi)未見明顯差異。在LIN-10與HIF-1的相關(guān)性研究中,在含有hif-1突變基因的實驗組動物神經(jīng)元中未見明顯LIN-10熒光標記,而在不含有hi