解耦聯(lián)蛋白2在非酒精性脂肪性肝病過氧化損傷中的作用探討.pdf

1、目的:通過觀察京尼平、維生素E兩者單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)體外細(xì)胞模型中解耦聯(lián)蛋白2(LJCP2)的基因和蛋白水平表達(dá)、細(xì)胞線粒體膜電位變化和相關(guān)因子的水平變化,探討LJCP2在NAFLD過氧化損傷中的作用,以及京尼平和維生素E對(duì)NAFLD的干預(yù)作用和可能機(jī)制。
　　 方法:常規(guī)培養(yǎng)人永生化正常胎肝LO2細(xì)胞株,貼壁后分為5組:對(duì)照組常規(guī)培養(yǎng)72 h；模型組采用軟脂酸誘導(dǎo)LO2細(xì)胞72 h,建立非酒精性脂

2、肪性肝病體外模型；干預(yù)組A在建模同時(shí)給予維生素E(VitE)干預(yù)72 h；干預(yù)組B在建模同時(shí)給予京尼平干預(yù)72 h；干預(yù)組C在建模同時(shí)給予兩者合用干預(yù)作用72小時(shí)。油紅O染色光學(xué)顯微鏡觀察LO2細(xì)胞脂變情況；檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)、甘油三酯(TG)水平,丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧酶(SOD)活力；羅丹明123單染法觀察線粒體膜電位變化；RT-PCR檢測(cè)

3、各組細(xì)胞UCP2、NF-κB和TNF-a的mRNA表達(dá)情況；Western blot檢測(cè)UCP2、NF-κB和TNF-a蛋白水平表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.成功誘導(dǎo)LO2細(xì)胞脂肪變性,建立非酒精性脂肪性肝病體外模型。
　　 2.與對(duì)照組比較,模型組LO2細(xì)胞脂肪變性顯著；細(xì)胞上清ALT、AST、GGT、TG水平和MDA含量升高,SOD活力降低；線粒體膜電位降低；UCP2、NF-κB和TNF-a在基因和蛋白水平

4、的表達(dá)均增高。
　　 3.與模型組比較,干預(yù)組A、B、C LO2細(xì)胞脂肪變性面積減小、程度減輕；細(xì)胞上清ALT、AST、GGT、TG水平和MDA含量降低,SOD活力升高；線粒體膜電位增高；UCP2、NF-κB和TNF-a在基因和蛋白水平的表達(dá)有不同程度降低。尤以干預(yù)組C為最。
　　 結(jié)論:
　　 1.UCP2的高表達(dá)與NAFLD的過氧化損傷有關(guān)。
　　 2.NF-κB和TNF-a參與了NAFLD的發(fā)生。<