2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩139頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、1豬LSM14A基因抑制PRRSV復(fù)制的功能研究
  豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),又稱豬藍(lán)耳病,是一種全球性的病毒性傳染性疾病,主要由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起。PRRSV是一種單股正鏈的RNA病毒,主要造成仔豬高死亡率

2、、各年齡階段豬的呼吸道病癥,以及妊娠母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等危害,給養(yǎng)豬業(yè)造成極大的損失。
  模式識(shí)別受體(Pattern recognition receptors,PRRs)通常包括質(zhì)膜定位的Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs),胞質(zhì)定位的RIG-Ⅰ樣受體(RIG-Ⅰ-like receptors,RLRs)和NOD樣受體(NOD-like receptors,NLRs)等,在先天免疫反應(yīng)中通

3、過識(shí)別病原相關(guān)分子模式(Pathogen associated molecular patterns,PAMPs)發(fā)揮著重要的作用。LSM14A作為一種新型胞質(zhì)病毒核酸受體,可以直接識(shí)別并結(jié)合病毒核酸,包括RNA和DNA,繼而通過與RIG-Ⅰ或VISA相互作用,介導(dǎo)Ⅰ型干擾素(Interferons,IFNs)的表達(dá)。過表達(dá)LSM14A可以有效抑制水皰性口炎病毒(Vesicular stomatitisvirus,VSV)和新城疫病毒(

4、Newcastle Disease virus,NDV)在293細(xì)胞中的復(fù)制,但是過表達(dá)LSM14A基因是否對(duì)PRRSV復(fù)制產(chǎn)生影響尚未見報(bào)道。因此,本研究以新型病毒核酸受體LSM14A作為抗病候選基因,在非洲綠猴腎細(xì)胞(Marc-145cells)和豬肺泡巨噬細(xì)胞(Porcine alveolar macrophages,PAMs)中進(jìn)行相關(guān)的功能研究,以期解析該基因在PRRSV復(fù)制過程中的作用。得到如下結(jié)果:
  (1)成功克

5、隆了通城豬LSM14A、IFI6、IFI16、PPBP、ZDHHC9和CLU基因,分別構(gòu)建了真核過表達(dá)載體pRK-Flag-LSM14A、pRK-Flag-IFI6、pRK-Flag-IFI16、pRK-Flag-PPBP、pRK-Flag-ZDHHC9和pRK-Flag-CLU,在Marc-145細(xì)胞中通過過表達(dá)實(shí)驗(yàn)研究這些基因?qū)RRSV復(fù)制的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達(dá)LSM14A基因可以顯著抑制病毒復(fù)制。
  (2)在Marc-1

6、45細(xì)胞中通過過表達(dá)及干擾,采用定量PCR、免疫熒光和空斑實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LSM14A基因可以抑制PRRSV復(fù)制,并且采用干擾回復(fù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了干擾片段的特異性及有效性。同時(shí)采用體外重組的方法構(gòu)建了腺病毒Ad5-LSM14A,通過腺病毒感染的方法在PAMs中過表達(dá)了LSM14A基因,在PAMs中研究了該過表達(dá)基因?qū)?PRRSV復(fù)制的影響,結(jié)合在PAMs中干擾LSM14A基因?qū)嶒?yàn)說明LSM14A在PAMs中可以抑制PRRSV復(fù)制。
  (3)在

7、Marc-145細(xì)胞中通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)過表達(dá)LSM14A基因可以激活I(lǐng)FN-β和ISRE的啟動(dòng)子活性,PRRSV感染可以協(xié)同LSM14A基因促進(jìn)IFN-β和ISRE啟動(dòng)子活性的激活。同時(shí)過表達(dá)LSM14A基因后,IFN-β和RIG-Ⅰ基因表達(dá)量分別被上調(diào),一些典型的干擾素誘導(dǎo)基因(IFN-stimulated genes,ISGs)包括IFITMs、IFITs和OAS1的表達(dá)量也都被顯著的上調(diào)。結(jié)合啟動(dòng)子的數(shù)據(jù)說明,在Ma

8、rc-145細(xì)胞中過表達(dá)LSM14A可以激活I(lǐng)FN-β抗病毒信號(hào)通路,從而抑制PRRSV的復(fù)制。
  (4)在Marc-145細(xì)胞中過表達(dá)LSM14A基因后,促炎因子IL-6、TNF-α基因表達(dá)被抑制,說明在Marc-145細(xì)胞中,免疫系統(tǒng)通過激活干擾素抗病毒通路同時(shí)抑制過度炎癥反應(yīng),達(dá)到抑制病毒復(fù)制的效果。
  (5)定量PCR檢測了PRRSV感染7天后的通城豬及大白豬PAMs、脾、肺、淋巴細(xì)胞及組織樣中LSM14A基因的

9、相對(duì)表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)通城豬和大白豬感染PRRSV后LSM14A基因的表達(dá)被抑制。
  2 G4基因激活NF-κB的功能研究
  主要組織相容性復(fù)合體(Major histocompatibility complex,MHC)又稱白細(xì)胞抗原復(fù)合體(Leukocyte Antigen complex,LA complex),經(jīng)典的分類方法將MHC分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三個(gè)區(qū),主要參與機(jī)體免疫反應(yīng),與多種疾病存在一定的相關(guān)性。近年研究發(fā)現(xiàn)MH

10、CⅢ區(qū)中靠近端粒的一側(cè)富含涉及炎癥反應(yīng)的基因,例如TNF超家族成員等,因而Gruen和Weissman將這一區(qū)域命名為MHC-Ⅳ區(qū)。MHC-Ⅳ區(qū)G4是其中研究較少的新基因之一,它位于Hsp70與AIF-1、TNF之間,與成纖維細(xì)胞生長因子受體3(Fibroblast growth factor receptor3,F(xiàn)GFR3)存在互作,同時(shí)人G4基因在關(guān)節(jié)炎患者單核細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著低于正常對(duì)照組,說明G4與炎癥反應(yīng)有著一定的聯(lián)系。核

11、轉(zhuǎn)錄因子NF-κB在機(jī)體炎癥反應(yīng)進(jìn)程中發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用,因此本研究從MHC-Ⅳ區(qū)的新基因和課題組前期G4基因的研究結(jié)果出發(fā),探索G4基因在NF-κB信號(hào)通路中扮演的角色,并從細(xì)胞和個(gè)體水平分析G4蛋白的定位特征,繼而進(jìn)一步解析G4基因與炎癥反應(yīng)的關(guān)系。得到了如下結(jié)果:
  (1) G4是MHC-Ⅳ中激活NF-κB的一個(gè)重要基因。本研究從MHC-Ⅳ中篩選了7個(gè)功能尚不清楚基因,包括ABHD16A、G4(C6orf47)、C6o

12、rf48、GPANK1、MCCD1、SAPCD1和ZBTB12,研究這些基因是否參與NF-κB信號(hào)通路的激活,結(jié)果顯示這7個(gè)新基因中僅G4可以顯著激活NF-κB,其他基因不參與NF-κB信號(hào)通路的激活。同時(shí)我們又從蛋白水平做了驗(yàn)證,共轉(zhuǎn)染G4與p65后免疫熒光結(jié)果顯示p65蛋白由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核,提示此時(shí)NF-κB信號(hào)通路被激活,進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用。
  (2)在BHK21細(xì)胞中進(jìn)行的免疫熒光實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)G4蛋白過表達(dá)后有細(xì)胞

13、膜定位趨勢(shì),并且和早期內(nèi)涵體存在部分共定位。利用小鼠組織樣進(jìn)行的免疫組化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)內(nèi)源G4蛋白主要分布于膀胱和肺上皮細(xì)胞,同時(shí)內(nèi)源性G4蛋白在小鼠膀胱上皮細(xì)胞中存在細(xì)胞質(zhì)膜分布的現(xiàn)象,但是沒有發(fā)現(xiàn)G4蛋白在大腦、小腦、小腸及肝臟中存在分布。
  (3) G4基因激活NF-κB依賴IκB激酶復(fù)合物(Nuclear factor kappa-B kinase,IKK)復(fù)合物而非轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶1(TGF-beta-activate

14、dkinase1,TAK1)復(fù)合物。IKK復(fù)合物處于NF-κB信號(hào)通路的中下游,IKK復(fù)合物抑制劑PS1145可以顯著抑制過表達(dá)G4基因?qū)F-κB信號(hào)通路,表明G4基因激活NF-κB信號(hào)通路的位置在IKK復(fù)合物的上游;TAK1復(fù)合物處于NF-κB信號(hào)通路的上游,TAK1復(fù)合物抑制劑5Z-7-oxozeaenol、TAK1顯性失活突變體TAK1(K63 W),都不能影響G4基因激活NF-κB信號(hào)通路的能力,表明G4基因激活NF-κB信號(hào)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論