水稻光敏感蛋白OsLIR1與LFNR互作的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、水稻OsLIR1(LOC_Os01g01340)(Light Regulated protein1)是一個單拷貝核編碼蛋白，很早以前OsLIR1基因在mRNA水平受光與晝夜節(jié)律調(diào)控就已經(jīng)被報道，但該蛋白的功能一直未知。為研究該基因蛋白水平在光暗下的變化，本研究發(fā)展了OsLIR1基因自身啟動子融合CDS的Flag標簽材料（LIR1p-Flag-LIR1）。
　　本研究發(fā)現(xiàn)，OsLIR1基因的轉(zhuǎn)錄水平與蛋白水平都受到光的調(diào)控，但兩者的

2、表達水平卻是相反的。主要表現(xiàn)在:OsLIR1基因的mRNA在光下積累，并在一天光照結(jié)束時達到表達最高值，在黑暗中mRNA表達逐漸降低，并在黎明前達到表達最低值;但OsLIR1蛋白水平與mRNA水平正好相反，在光照條件下OsLIR1降解，黑暗中蛋白積累，并且OsLIR1的光降解速率與光強度成正比。在MG132（蛋白酶體抑制劑）和E-64d（溶酶體酶抑制劑）處理條件下檢測OsLIR1的光降解，發(fā)現(xiàn)LIR1的光降解不是由泛素化-蛋白酶體降解系

3、統(tǒng)或溶酶體降解系統(tǒng)控制降解的。
　　通過對Flag融合標簽材料進行免疫親和純化并結(jié)合液質(zhì)聯(lián)譜分析，我們找到了OsLIR1的互作蛋白鐵氧還蛋白-NADP+氧化還原酶(OsLFNR)。通過酵母雙雜、Co-IP等實驗手段證明OsLIR1確實與LFNR1、LFNR2都互作。亞細胞定位分析表明，OsLIR1與LFNR共定位在葉綠體膜、基質(zhì)和類囊體膜上。LFNR是光合電子傳遞過程中非常關鍵的酶，負責催化光合電子傳遞的最后一步，將電子從鐵氧還蛋

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