水稻光敏感蛋白OsLIR1與LFNR互作的研究.pdf

1、水稻OsLIR1(LOC_Os01g01340)(Light Regulated protein1)是一個(gè)單拷貝核編碼蛋白，很早以前OsLIR1基因在mRNA水平受光與晝夜節(jié)律調(diào)控就已經(jīng)被報(bào)道，但該蛋白的功能一直未知。為研究該基因蛋白水平在光暗下的變化，本研究發(fā)展了OsLIR1基因自身啟動(dòng)子融合CDS的Flag標(biāo)簽材料（LIR1p-Flag-LIR1）。
　　本研究發(fā)現(xiàn)，OsLIR1基因的轉(zhuǎn)錄水平與蛋白水平都受到光的調(diào)控，但兩者的

2、表達(dá)水平卻是相反的。主要表現(xiàn)在:OsLIR1基因的mRNA在光下積累，并在一天光照結(jié)束時(shí)達(dá)到表達(dá)最高值，在黑暗中mRNA表達(dá)逐漸降低，并在黎明前達(dá)到表達(dá)最低值;但OsLIR1蛋白水平與mRNA水平正好相反，在光照條件下OsLIR1降解，黑暗中蛋白積累，并且OsLIR1的光降解速率與光強(qiáng)度成正比。在MG132（蛋白酶體抑制劑）和E-64d（溶酶體酶抑制劑）處理?xiàng)l件下檢測(cè)OsLIR1的光降解，發(fā)現(xiàn)LIR1的光降解不是由泛素化-蛋白酶體降解系

3、統(tǒng)或溶酶體降解系統(tǒng)控制降解的。
　　通過(guò)對(duì)Flag融合標(biāo)簽材料進(jìn)行免疫親和純化并結(jié)合液質(zhì)聯(lián)譜分析，我們找到了OsLIR1的互作蛋白鐵氧還蛋白-NADP+氧化還原酶(OsLFNR)。通過(guò)酵母雙雜、Co-IP等實(shí)驗(yàn)手段證明OsLIR1確實(shí)與LFNR1、LFNR2都互作。亞細(xì)胞定位分析表明，OsLIR1與LFNR共定位在葉綠體膜、基質(zhì)和類囊體膜上。LFNR是光合電子傳遞過(guò)程中非常關(guān)鍵的酶，負(fù)責(zé)催化光合電子傳遞的最后一步，將電子從鐵氧還蛋