自殺基因修飾的內皮祖細胞對小鼠原位移植性肝細胞癌的治療初探.pdf

1、[研究目的]
　　本課題研究自殺基因胞嘧啶脫氨酶(cytosine deaminase，CD)基因轉染的小鼠骨髓源性內皮祖細胞(endothelial progenitor cells，EPCs)聯(lián)合酶前體藥物5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC）對小鼠H22細胞原位移植性肝細胞癌的抑制作用。初步探討CD基因修飾的內皮祖細胞聯(lián)合5-FC對小鼠原位移植性肝細胞癌的治療效果。
　　[研究方法]
　　1.

2、分離小鼠骨髓源性EPCs，培養(yǎng)鑒定后，采用Polybrene技術轉染含CD基因的慢病毒載體重組體plenti6.3-EGFP-CD至EPCs，熒光顯微鏡下觀察基因轉染情況。在不同濃度5-FC及不同作用時間下，利用CCK-8法檢測轉染CD基因的EPCs上清液聯(lián)合5-FC對肝癌H22細胞體外增殖能力影響。
　　2.腹水細胞法制作C57BL/6小鼠原位移植肝細胞癌模型，尾靜脈注射轉染CD基因的EPCs和5-FC聯(lián)合治療肝癌模型鼠，觀察移

3、植瘤體積重量變化，計算抑瘤率。TUNEL法檢測腫瘤凋亡，Western blotting檢測CD蛋白表達。
　　[研究結果]
　　1.成功轉染CD基因至EPCs，熒光顯微鏡下呈現(xiàn)綠色熒光。CCK-8法檢測顯示隨著5-FC濃度增加，經(jīng)CD基因轉染的EPCs上清液處理的H22細胞增殖逐漸下降，5-FC濃度達100 mg/L時，腫瘤細胞增殖抑制率達到約（50.70±4.47）％(P＜0.05);隨著作用時間的延長，經(jīng)CD基因轉染的

4、EPCs上清液處理的H22細胞增殖明顯減少(P＜0.05)。
　　2.小鼠原位移植肝癌模型成瘤率為100％;轉染CD基因的EPCs實驗組小鼠瘤體組織CD蛋白陽性表達，腫瘤生長受到抑制，腫瘤重量和體積抑制率分別為（45.81±9.92）％和（61.27±13.29）％(P＜0.05)，腫瘤細胞凋亡率為（39.98±5.13）％。
　　[結論]
　　CD基因修飾的EPCs聯(lián)合5-FC作用體外實驗可抑制肝癌H22細胞增殖;尾