MIF基因和LB1藥物在口腔鱗癌中作用的初步研究.pdf

1、第一部分、MIF基因在口腔鱗癌中作用的初步研究
　　目的：旨在探討巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）在口腔鱗癌細(xì)胞系及口腔鱗癌患者組織標(biāo)本中的表達(dá)量、意義及在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中對于口腔鱗癌細(xì)胞系生物學(xué)行為的影響。
　　方法:采用western blotting和real-time PCR技術(shù)檢測口腔鱗癌細(xì)胞系以及口腔鱗癌患者癌與癌旁配對組織樣本中MIF的表達(dá)

2、；采用免疫組織化學(xué)方法檢測109例口腔鱗癌患者組織樣本中MIF蛋白的表達(dá)，分析其表達(dá)量與患者臨床病理學(xué)指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系；構(gòu)建含有干擾MIF表達(dá)的siRNA序列的慢病毒載體，轉(zhuǎn)染口腔鱗癌細(xì)胞系HN4、HN13及HN30，研究MIF的表達(dá)降低對于細(xì)胞體內(nèi)外生物學(xué)行為的影響，并檢測相關(guān)信號通路及蛋白的表達(dá)變化；采用MTT法檢測MIF小分子抑制劑對口腔鱗癌細(xì)胞活力的影響。
　　結(jié)果：在7種口腔鱗癌細(xì)胞系中均檢測到MIF mRNA及蛋白不同

3、程度的表達(dá)，其中HN12的MIF表達(dá)量最高；MIF在口腔鱗癌患者組織樣本中的表達(dá)與臨床T分期相關(guān)（P＝0.024），即腫瘤越大，MIF表達(dá)越高；MIF中低表達(dá)的口腔鱗癌患者總體生存率為87.5％，MIF高表達(dá)的口腔鱗癌患者總體生存率為50.0%，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.002）； MIF表達(dá)量（P＝0.013）、臨床T分期（P＝0.009）以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（P＝0.048）可以作為口腔鱗癌患者獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)；將含有MIF干擾

4、序列的慢病毒載體LV3-siMIF-1轉(zhuǎn)染至實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞系中，包括HN4、HN13、HN30及CAL27。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，干擾MIF的表達(dá)之后，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖、克隆形成、遷移及侵襲能力顯著下降，細(xì)胞凋亡顯著增多；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HN13及CAL27細(xì)胞的裸鼠皮下成瘤能力被明顯削弱；相關(guān)信號通路檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的Akt磷酸化水平較對照組出現(xiàn)一定程度的降低；MIF抑制劑ISO-1及4-IPP能夠顯著抑制口腔鱗癌細(xì)胞的活力。

5、>　　結(jié)論：MIF在口腔鱗癌患者組織樣本中的表達(dá)量可以作為預(yù)后預(yù)測的候選生物標(biāo)記物；干擾MIF的表達(dá)顯著影響口腔鱗癌細(xì)胞的生物學(xué)行為，可作為潛在治療靶標(biāo)；MIF小分子抑制劑能夠有效作用于口腔鱗癌細(xì)胞系，可以為開發(fā)新療法提供思路。
　　第二部分、LB1藥物在口腔鱗癌化療中作用的初步研究
　　目的：旨在初步探討LB1在口腔鱗癌化療體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中的作用。
　　方法:采用MTT法檢測LB1對口腔鱗癌細(xì)胞系活性的影響；采用流式細(xì)胞

6、學(xué)方法檢測LB1處理后口腔鱗癌細(xì)胞周期的分布；在倒置顯微鏡下觀察LB1處理后口腔鱗癌細(xì)胞的形態(tài)；采用常規(guī)病理學(xué)染色方法，觀察LB1藥物處理后口腔鱗癌細(xì)胞皮下成瘤的組織形態(tài)。
　　結(jié)果：LB1能夠顯著增強(qiáng)口腔鱗癌常用化療藥物5-氟尿嘧啶（5FU）及順鉑（CDDP）的效果；LB1處理后的口腔鱗癌細(xì)胞出現(xiàn)了G1期減少，G2期增多的趨勢，細(xì)胞核漿比增大，體積變小，外形變圓；LB1處理后裸鼠皮下成瘤的瘤體組織學(xué)上發(fā)生明顯改變，腫瘤細(xì)胞核固縮