IPS-1在滅活仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)小鼠黑色素瘤細(xì)胞凋亡中的雙重作用.pdf

1、IPS1在滅活仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)小鼠黑色素瘤細(xì)胞凋亡中的雙重作用IPS1playsadualfunctiontodirectlyinduceapoptosisinmurinemelanomacellsbyinactivatedsendaivirus研究生：徐曉雙學(xué)科：動(dòng)物學(xué)導(dǎo)師：薛整風(fēng)教授本研究由江蘇省自然科學(xué)基金(BK2011049)江蘇省“333’’人才工程項(xiàng)目(BK201140032)江蘇省獸用生物制品高技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(KF

2、0901)資助揚(yáng)卅f大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院2013年4月?lián)P州大學(xué)碩學(xué)位論文明了在HVJE對(duì)B16F10細(xì)胞的凋亡作用中，IFNI有重要的作用，并且它和MAPK通路的活化是獨(dú)立分開的。接下來，我們分析了干擾素刺激因子(IFNpromoterstimulator1，IPS1)在HVJE誘導(dǎo)B16F10凋亡過程中所起的作用。預(yù)先向B16F10細(xì)胞中轉(zhuǎn)染抑制IPS1表達(dá)的siRNA(抑制率達(dá)90％)，再用HVJE作用細(xì)胞，F(xiàn)ACS法檢測細(xì)胞的凋亡率；We

3、stemblot檢測pSTATl、Caspase3、PAI沖以及MAPK通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，IPS1的驟減強(qiáng)烈抑制了HVJE所引起的細(xì)胞凋亡：降低了STATl的磷酸化和caspase3通路的激活；降低了JNK和ERKl／2的磷酸化，p38MAPK除外。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步說明STATl的磷酸化以及Caspase3通路的激活是由少量的IFND調(diào)節(jié)的。而IPS1以非IFN1依賴的方式調(diào)節(jié)MAPK通路的活化。最后我們通過BALB／c裸鼠皮

4、下接種B16F10細(xì)胞制作小鼠黑色素瘤模型。實(shí)驗(yàn)組小鼠每只皮下注射1x106B16F10細(xì)胞和1109HVJE的混合液，對(duì)照組注射等量的B16F10細(xì)胞。接種后每隔一天測量荷瘤鼠的腫瘤體積，25天后制作腫瘤生長曲線。同時(shí)，另取兩組荷瘤小鼠，待瘤體直徑達(dá)O5cm時(shí)，小鼠瘤內(nèi)注射21010HVJE或者PBS，3天后處死，摘取腫瘤制作石蠟切片。HE&TUNEL法分析荷瘤裸鼠腫瘤石蠟切片。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組的腫瘤體積增長緩慢。而在H

5、E&TUNEL染色切片，注射HVJE的腫瘤切片中觀察到典型的凋亡細(xì)胞，細(xì)胞致密，染色質(zhì)濃染。本實(shí)驗(yàn)證明HVJE能誘導(dǎo)小鼠B16F10細(xì)胞凋亡，并呈劑量依賴性：凋亡過程與Caspase途徑激活有關(guān)，并與MAPK家族成員的活化有關(guān)。同時(shí)，我們還發(fā)現(xiàn)IPS1可以通過IFN1依賴的方式和非IFN1依賴的方式調(diào)節(jié)小鼠B16F10細(xì)胞的凋亡。最后，在BALB／c裸鼠黑色素瘤模型中，HVJE能顯著抑制腫瘤的生長。本實(shí)驗(yàn)對(duì)HVJE誘導(dǎo)B16F10細(xì)胞凋