VDBP單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性肝細胞癌患者發(fā)病風險的相關性研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性肝癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，其中約54％發(fā)生在中國，我國每年有37萬人死于肝癌，居所有惡性腫瘤死亡的第二位。由于原發(fā)性肝癌在人群中的高普遍性和高危害性，對原發(fā)性肝癌的發(fā)生和發(fā)展及其防治方面的研究一直是國內外的研究熱點。目前原發(fā)性肝癌的確切發(fā)病及發(fā)展惡化的機制尚不清楚，但近代細胞遺傳學和分子生物學研究表明，腫瘤的發(fā)展是多基因、多階段的復雜過程。隨著分子生物學理論與技術的發(fā)展，遺傳因素被證實與肝細胞癌有著密切關系

2、。
　　在基因組中，最普遍的變異就是單個堿基的差異，可以分為轉換與顛換、單堿基的插入與缺失等不同類型。對于其中發(fā)生率大于1％的變異被稱作單核苷酸多態(tài)性（single uncleotide polymorphism，SNP）。近年來，美國國立人類基因組研究院與SNP研究委員會(The SNP Consortium，TSC)發(fā)起的對SNP的大規(guī)模實驗研究表明，單核苷酸變異能夠為研究多基因復雜疾病及個體間患病風險及藥物反應的不同提供新方

3、法。人類所有群體中存在的SNP位點約1500萬個，平均每300～600bp存在一個基因突變。這些SNP可能是直接影響某些疾病如腫瘤、哮喘、心臟病的易感性基因位點。而如何使用SNP多態(tài)信息探索各種惡性腫瘤的的遺傳機制及在臨床上的應用已經成為當前國內外的研究熱點。
　　維生素D結合蛋白(vitamin D-binding protein，VDBP或Gc-globulin)是一種相對分子量為51000～58000的多功能血漿球蛋白，主要

4、合成于肝臟，和ALB、AFP、AFM一樣，是屬于白蛋白超家族中的一種結合蛋白，大部分為游離態(tài)的天然蛋白形式。近年來，人們在臨床實驗研究中發(fā)現(xiàn)VDBP與乳腺癌及前列腺癌、結腸癌等的發(fā)生均具有一定相關性。JakobAlbrethsen在對小鼠的肝癌組織中部分蛋白的檢測發(fā)現(xiàn)VDBP在小鼠的肝癌組織中表達明顯增高，但在癌前病變中表達量較低，其基因多態(tài)性可能與肝癌的關系在腫瘤防治中具有重要的意義。目前有關VDBP基因突變和人類原發(fā)性肝癌的發(fā)病風險

5、的報道較少且結果不一，應進行深入研究。
　　本實驗通過檢測原發(fā)性肝癌患者VDBP Glu416Asp(rs7041)、Thr420Lys(rs4588)位點的多態(tài)性，并考察伴有腫瘤血清學標志物、相關臨床參數(shù)的影響。為探討VDBP多態(tài)性和原發(fā)性肝癌患者發(fā)病的風險提供實驗依據(jù)。
　　實驗方法：
　　1、本研究采用以醫(yī)院為基礎的病例-對照研究方法。病例為2007年1月至2010年12月在中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院進行住院治療，

6、臨床診斷明確，未經放射和抗癌藥物治療的149例年齡為31～85歲的肝癌新發(fā)病例;對照組為同期在同一醫(yī)院體檢中心進行健康體檢且體檢結果正常、無腫瘤病史及遺傳病史且年齡與病例組相匹配的246例健康人群。在隨機血液樣品標本的同時，收集每個研究對象的人口學資料集臨床相關參數(shù)。
　　2、采用酚氯仿法從抗凝血中提取基因組DNA，接下來通過聚合酶鏈反應-實時熒光定量的方法，檢測VDBP Glu416Asp、Thr420Lys位點基因型。

7、　　3、統(tǒng)計學分析:應用統(tǒng)計分析軟件包SPSS19.0計算。采用卡方檢驗比較基因型的組間分布頻率，分析不同基因型與原發(fā)性肝癌的相關性。采用非條件logistic回歸分析計算比值比(odds ratios，OR)和95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)，分析不同基因型與原發(fā)性肝癌風險和臨床病例特征之間的相關性。所有的統(tǒng)計學檢驗均為雙側概率檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1、rs7

8、041位點在肝癌組中基因型分布如下:基因型Asp/Asp為60人，基因型Asp/Glu為70人，基因型Glu/Glu為19人，分別占40.3％、47.0％、12.8％;在對照組中基因型分布如下:基因型Asp/Asp為112人，基因型Asp/Glu為103人，基因型Glu/Glu為31人，分別占45.5％、41.9％、12.6％。經卡方檢驗證實rs7041多態(tài)位點在對照組中基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡遺傳平衡定律(P

9、＞0.05)。rs4588位點在肝癌組中基因型分布如下:基因型Thr/Thr為85人，基因型Thr/Lys為58人，基因型Lys/Lys為6人，分別占57.0％、38.9％、4.0％;在對照組中基因型分布如下:基因型Thr/Thr為125人，基因型Thr/Lys為104人，基因型Lys/Lys為17人，分別占50.8％、42.3％、6.9％。
　　2、經Logistic回歸分析我們發(fā)現(xiàn)以rs7041基因型Asp/Asp為參照，基因

10、型Asp/Glu個體的發(fā)病風險未見增高(OR=1.144，95％CI:0.596-2.195，P=0.686)，在基因型Glu/Glu中末見明確相關性（OR=1.26995％CI:0.820-1.963，P=0.285）。此外，rs4588多態(tài)基因型和肝癌發(fā)病風險也未見相關性，與攜帶基因型Thr/Thr個體相比較，攜帶基因型Thr/Lys個體與肝細胞癌的發(fā)病風險未見明顯差異（OR=0.519，95％CI:0.197-1.370，P=0.

11、185），攜帶基因型Lys/Lys個體與肝細胞癌的發(fā)病風險未見明顯差異(OR=0.820，95％CI:0.537-1.252，P=0.358)。
　　3、本研究的臨床參數(shù)包括血清AFP水平、肝炎標志物(B、C、B+C、NBNC)、肝硬化、ECOG評分、腫瘤大小(≤5 cm、＞5 cm、diffuse)、Child-pugh(A、B)分級等信息，經統(tǒng)計分析后，rs7041位點和腫瘤大小具有一定相關性(P=0.031)。其余臨床參數(shù)和