VEGF-A及ANGPT單核苷酸多態(tài)性與原發(fā)性肝癌患者TACE治療預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我國(guó)乃至全世界常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在全世界腫瘤的發(fā)病率中排名第五，其死亡率在腫瘤中居第三。由于HCC起病隱匿，確診時(shí)多屬晚期，已失去手術(shù)時(shí)機(jī)，對(duì)無(wú)法手術(shù)切除的晚期HCC，肝動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(TACE)是一種重要的治療手段。在臨床治療中我們經(jīng)常觀察到:相同基礎(chǔ)狀態(tài)、相同病理類型、相同腫瘤分期的患者采用相同TACE治療方案后，肝癌患者的治療效果及預(yù)后仍然存在較

2、顯著的差異。造成這種差異的原因多種多樣，但是患者的遺傳背景可能是造成這種差異的重要因素之一。
　　在肝癌患者的遺傳學(xué)研究中，單核苷酸多態(tài)性（Single NucleotidePolymorphisms，SNPs）是研究的熱點(diǎn)，因?yàn)樗菑V泛分布于人類基因組中的穩(wěn)定多態(tài)性位點(diǎn)?？梢暂^好的反映個(gè)體的遺傳背景，鑒別患者之間的個(gè)體差異，為提高腫瘤的個(gè)體化治療效率提供充足的理論依據(jù)，同時(shí)為探索腫瘤預(yù)后的影響因素提供技術(shù)支持。由此看出，關(guān)于單核

3、苷酸多態(tài)性(SNP)的研究在肝細(xì)胞癌的診斷治療及預(yù)后評(píng)估有廣泛的應(yīng)用前景和實(shí)用價(jià)值。
　　血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF-A)和血管生成素(ANGPT)是目前發(fā)現(xiàn)的活性及特異性最強(qiáng)的血管生成因子。最近有研究發(fā)現(xiàn)VEGF-A中2個(gè)染色體區(qū)域中的SNPs位點(diǎn)rs833061，rs1570360與肝癌易感性相關(guān)，熒光素酶活性檢測(cè)提示該位點(diǎn)的變異可能改變了啟動(dòng)子的活性有助于肝癌易感。而ANGPT的SNP位點(diǎn)rs1954727與結(jié)直腸癌患者

4、總體生存率相關(guān)。但這些變異位點(diǎn)是否與肝癌預(yù)后有關(guān)尚未見報(bào)道。因此我們對(duì)肝癌人群VEGF-A及ANGPT的單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)，并考察伴有腫瘤血清學(xué)標(biāo)志物、相關(guān)臨床參數(shù)、治療方案及預(yù)后情況的影響。
　　目的：
　　旨在研究變異位點(diǎn)基因分布與原發(fā)性肝癌介入治療預(yù)后的相關(guān)性，為闡明原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展并延長(zhǎng)患者術(shù)后生存期提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1、本研究采用以醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例-對(duì)照研究方法。病例選自2007年

5、1月至2013年6月在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院進(jìn)行住院治療，臨床診斷明確，未經(jīng)放射和抗癌藥物化療的421例肝癌新發(fā)病例，符合標(biāo)準(zhǔn)、資料完整的為330例。對(duì)所有患者及家屬均實(shí)行告知義務(wù)。收集5ml外周血液用于本研究，這些樣本及時(shí)送往實(shí)驗(yàn)室并均保存于-80攝氏度。
　　2、采用酚氯仿法從抗凝血中提取基因組DNA，接下來(lái)通過聚合酶鏈反應(yīng)-實(shí)時(shí)熒光定量的方法，檢測(cè)rs833061、rs1570360、rs1954727、rs3739390

6、位點(diǎn)基因型分布。
　　3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用卡方檢驗(yàn)比較各位點(diǎn)多態(tài)基因型在臨床分期及病理變化指標(biāo)上的分布差異，運(yùn)用Logistice回歸模型計(jì)算風(fēng)險(xiǎn)比（Hazard rate，HR）及其95％可信區(qū)間（95％confidence interval，95％CI）。通過Kaplan-Meier的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法預(yù)測(cè)肝癌患者經(jīng)肝動(dòng)脈化療栓賽后的生存情況，通過單因素及多因素Cox模型分析影響肝癌發(fā)病的因素。所用統(tǒng)計(jì)軟件為SPSS17.0。

7、　　結(jié)果:
　　1、rs833061在肝癌中基因分布如下:基因型C/C為22人，基因型TT為192人，基因型C/T為116人。經(jīng)卡方檢驗(yàn)證該多態(tài)位點(diǎn)基因型分布頻率符合Hardy-Weinberg平衡遺傳平衡定律（P=0.4347＞0.05）。rs1570360在肝癌中基因分布如下，基因型A/A為12人，基因型G/G為241人，基因型A/G為77人。同樣符合Hardy-Weinberg平衡遺傳平衡定律（P=0.0692＞0.05）。

8、rs1954727在肝癌中基因分布如下，基因型C/C為90人，基因型G/G為83人，基因型C/G為157人。Hardy-Weinberg平衡遺傳平衡定律檢驗(yàn)（P=0.3827＞0.05）。rs3739390在肝癌中基因分布如下，基因型C/C為261人，基因型G/G為61人，基因型C/G為8人。Hardy-Weinberg平衡遺傳平衡定律檢驗(yàn)(P=0.0609＞0.05)。
　　2、Kaplan-Meier生存分析顯示VEGF基因中

9、的SNP位點(diǎn)rs833061患者人群中，攜帶T/T基因型的患者發(fā)展為疾病進(jìn)展的中位時(shí)間為21個(gè)月，而攜帶基因型C/T+C/C的患者為19個(gè)月，兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（log-rank P=0.009）。TNM分期Ⅲc、Ⅳ期的患者，在ANGPT1基因SNP位點(diǎn)rs1954727，攜帶C/C基因型患者中位生存時(shí)間為14個(gè)月，而攜帶G/G基因患者中位生存時(shí)間為19.5個(gè)月(Log-rankp=0.024)。多因素COX回歸分析顯示術(shù)前腫瘤最大

10、直徑(P=0.023)，肝功能child分級(jí)(P=0.046)，BCLC分期(P=0.000003)是影響總體生存期的體獨(dú)立因素，rs833061位點(diǎn)多態(tài)性是影響肝癌預(yù)后的獨(dú)立影響因(P=0.021)。rs833061位點(diǎn)突變純合型患者(T/T)與野生雜合型(C/T)及野生純合型(CC)的總體比較，突變純合型患者(T/T)的死亡風(fēng)險(xiǎn)降低了33％(HR=0.67;95％ CI，0.483-0.942; p=0.024)。
　　3、本

11、研究的臨床參數(shù)包括血清AFP水平、肝硬化、ECOG評(píng)分、腫瘤大小(≤5cm、5～10 cm、≥10cm.)、腫瘤單發(fā)及多發(fā)，腫瘤轉(zhuǎn)移，Child-pugh(A、B)分級(jí)、肝癌巴塞羅那分期，TNM(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)分期等信息，卡方檢驗(yàn)提示VEGF基因的SNP位點(diǎn)rs1570360患者人群中，腫瘤最大直徑＞5cm的分層中G/G等位基因表達(dá)頻率增加(P=0.017)，而在區(qū)域和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中A/A+A/G等位基因表達(dá)頻率卻明顯增加(P=0.

12、041)，TNM分期Ⅲc、Ⅳ期中，A/A+A/G等位基因表達(dá)頻率比G/G要高(P=0.005)。
　　結(jié)論:
　　1、行TACE治療的肝癌患者攜帶有VEGF-A基因rs833061位點(diǎn)中，基因型T/T的患者比攜帶有基因C/T+C/C的患者有更長(zhǎng)的生存期，含有T/T等位基因可能為保護(hù)基因。結(jié)果提示我們VEGF-A基因多態(tài)性或許可以作為術(shù)前預(yù)測(cè)TACE療效的方法之一。
　　2、VEGF-A基因rs1570360位點(diǎn)中，肝癌

13、患者在腫瘤最大直徑大于5cm的分層中G/G等位基因表達(dá)頻率增加(P=0.017)，而在區(qū)域和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者人群中A/A+A/G等位基因表達(dá)頻率卻明顯增加(P=0.041)。TNM分期中Ⅲc、Ⅳ期中，A/A+A/G等位基因表達(dá)頻率比G/G要高(P=0.005)。
　　3、在中晚期肝癌患者中，ANGPT基因rs1954727在野生純和型患者與突變純合型患者總體生存率之間存在明顯差異(Log-rankp=0.024)。攜帶C/C等位基因