OPTC-shRNA干擾對(duì)牛玻璃體細(xì)胞與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞共培養(yǎng)腺原凝膠收縮系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的:探討抑制opticin蛋白表達(dá)對(duì)牛玻璃體細(xì)胞與視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞共培養(yǎng)膠原凝膠收縮系統(tǒng)的調(diào)控作用。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)研究。設(shè)計(jì)并轉(zhuǎn)染OPTC-shRNA質(zhì)粒至體外培養(yǎng)的牛RPE細(xì)胞，通過免疫印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后3、5、7 d opticin蛋白的相對(duì)表達(dá)量和抑制率。在牛Ⅰ型膠原凝膠內(nèi)加入牛玻璃體細(xì)胞和RPE細(xì)胞，構(gòu)建細(xì)胞共培養(yǎng)的膠原凝膠體外收縮模型。實(shí)驗(yàn)共分為6組:OPTC-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RPE及玻璃體細(xì)胞組（A

2、組）、空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染RPE及玻璃體細(xì)胞組（B組）、未轉(zhuǎn)染RPE及玻璃體細(xì)胞組（C組）、僅含未轉(zhuǎn)染RPE細(xì)胞組（D組）、僅含玻璃體細(xì)胞組（E組）以及不合任何細(xì)胞空白對(duì)照組（F組）。應(yīng)用One-way ANOVA、SNK-q檢驗(yàn)和單因素回歸分析比較各組凝膠收縮差異，并分析A、B、C組玻璃體細(xì)胞數(shù)的差異對(duì)膠原凝膠收縮性狀的影響。
　　 結(jié)果:成功構(gòu)建并轉(zhuǎn)染了有顯著抑制作用的OPTC-shRNA質(zhì)粒至牛RPE細(xì)胞。免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，o

3、pticin蛋白表達(dá)抑制率在轉(zhuǎn)染后3、5、7d分別為(83.91±2.88)、(84.71±4.27)、(82.85±2.72)％，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.15，P＞0.05)。膠原模型構(gòu)建后3d，A、B、C組中不同濃度（2×104、1×105、5×105個(gè)/ml）亞組玻璃體細(xì)胞密度凝膠收縮率分別為:A組:(23.52±2.08)、(56.00±1.02)、(61.62±1.73)％;B組:(16.56±2.01)、(36.41±1.

4、33)、(49.56±1.75)％;C組:(15.75±1.37)、(37.45±1.14)、(48.45±1.97)％，D、E組凝膠收縮率分別為(12.18±0.95)、(10.95±0.93)％，F(xiàn)組未觀察到凝膠收縮。在相同玻璃體細(xì)胞密度下A、B、C三組間凝膠收縮性兩兩比較，2×104/ml細(xì)胞密度:A組與B組、 A組與C組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=11.38、12.72，P值均＜0.05）;B組與C組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=1.34

5、，P＞0.05）;1×105個(gè)/ml細(xì)胞密度:A組與B組、A組與C組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=48.83、46.22，P值均＜0.05）;B組與C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=-2.61，P＞0.05）;5×105個(gè)/ml細(xì)胞密度:A組與B組、A組與C組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=48.83、46.22，P值均＜0.05）;B組與C組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（q=1.74，P＞0.05）。A、B、C各組內(nèi)不同玻璃體細(xì)胞密度之間凝膠收縮性兩兩比較(2×104

6、個(gè)/ml與1×105個(gè)/ml、2×104個(gè)/ml與5×105個(gè)/ml、2×104個(gè)/ml與2×104個(gè)/ml):A、B、C3組內(nèi)各細(xì)胞密度之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（A組:q=-55.97、-65.66、-9.69;B組q=-34.53、-57.41、-22.88;C組q=-41.94、-63.19、-21.25;P值均＜0.05）。進(jìn)一步對(duì)組內(nèi)不同玻璃體細(xì)胞密度與對(duì)應(yīng)的凝膠收縮率進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示，共培養(yǎng)模型的凝膠收縮率與其中的玻璃體